Syphilis Total Ab 1 plaka - 96 72530 5 plaka - 480 72531 - Bio-Rad

Syphilis Total Ab
1 plaka - 96
5 plaka - 480
72530
72531
ENZİM İMMÜNO TEST TEKNİĞİ KULLANARAK İNSAN SERUMUNDA VEYA
PLAZMASINDA TREPONEMA PALLIDUM ANTİ BADİSİNİN KALİTATİF TESPİT
KİTLERİ
883679 - 2014/11
[TR] 1
İÇİNDEKİLER
1.
KULLANIM AMACI .................................................................................... 3
2.
TESTİN ÖZETİ VE AÇIKLAMASI ............................................................... 3
3.
PROSEDÜRÜN PRENSİPLERİ ................................................................. 3
4.
REAKTİFLER ........................................................................................... 4
5.
UYARILAR VE ÖNLEMLER ....................................................................... 5
6.
ÖRNEKLER ............................................................................................. 6
7.
PROSEDÜR ............................................................................................. 7
8.
TEST KISITLAMALARI .............................................................................. 9
9.
PERFORMANS KARAKTERİSTİKLERİ .................................................... 10
10.
BİBLİYOGRAFİ VE REFERANSLAR. ....................................................... 13
[TR] 2
1. KULLANIM AMACI
Bu kitler, uygun eğitime ve niteliğe sahip personel tarafından insan serumunda ve plazmasında
Treponema pallidum antibadilerinin kalitatif tespitine yöneliktir. Ürün, kan donörlerinin taranmasında ve
sifilis enfeksiyonundan şüphelenilen hastalara teşhis konulmasına yardımcı olmak için kullanılabilir.
2. TESTİN ÖZETİ VE AÇIKLAMASI
Sifilis, farklı enfeksiyon aşamalarından; birinci, ikinci, üçüncü ve dördüncü aşamalardan geçerek
ilerleyen kronik bir enfeksiyondur. Bu aşamalar farklı klinik semptomlar oluşturur; tipik olarak önce
şankr olarak bilinen ilk yaralara, daha sonra ise sifilitik döküntülere ve bunu takip eden uzun durgunluk
sürelerine yol açar. Tedavi edilmeyen enfeksiyon nihai olarak kardiyovasküler sorunlara ve nörosifilize
yol açabilir.
Enfeksiyona genellikle spirochaete Treponema pallidum yol açar ve çoğunlukla cinsel temas ile bulaşır
ancak enfekte kan nakli yoluyla da bulaşabilir. Anne karnında bebeğe geçiş de gerçekleşir.
Organizmanın yapay ortamda üretilmesi neredeyse imkansızdır ve enfeksiyonun teşhisi çoğunlukla ilk
enfeksiyondan kısa süre sonra ortaya çıkan ve uzun yıllar boyunca varlığını koruyabilen kandaki anti
badilerin gösterilmesine bağlıdır.
Sifilis testleri dört kategoriye ayrılır: doğrudan mikroskobik muayene, treponemal anti badi testleri,
tereponemal olmayan anti badi testleri ve doğrudan antijen testleri. Uzun süre durağan kalmaya ve
treponemal olmayan testlerin nonspesifik yapısına bağlı olarak, kan örneklerindeki spesifik antitreponemal anti badileri algılayan yöntemler tarama için gittikçe daha popüler hale gelmiştir. Syphilis
Total Ab, böyle bir testtir.
3. PROSEDÜRÜN PRENSİPLERİ
Syphilis Total Ab bir sandviç testteki üç rekombinant antijeni kullanır. Antijenler T. pallidum'a özgü IgG,
IgM, ve IgA'yı tespit ederek testin enfeksiyonun bütün aşamalarında anti badileri tespit etmesine
olanak sağlayacaktır.
Çukurcuklar 15Kd, 17Kd ve 47Kd T. pallidum rekombinant antijenleri karışımı ile kaplıdır. Örneğin
inkübe edildiği bir çukurcuğa konjuge edildiğinde serumdaki veya plazmadaki spesifik anti badiler bu
antijenlerle ve kara turp peroksidaza konjuge olan aynı antijenlerle birleşir. Reaksiyona girmeyen
materyal yıkanarak temizlendikten sonra, örnekte spesifik anti badilerin mevcut olduğunu gösteren
bağlı enzimin mevcudiyeti substratın/kromojen karışımının renk değiştirmesi ile ortaya çıkar. Rengin
kontrol çukurcuklarındaki renge kıyasla yoğunluğu spesifik anti badilerin mevcut olup olmadığını
belirlemek için karşılaştırılır.
[TR] 3
4. REAKTİFLER
4.1. Açıklama
Etiket üzerindeki
tanıtıcı
R1
Microplate
R2
Concentrated
Washing
Solution (20X)
R3
Negative
control
Açıklama
Sunum / hazırlama
72530
Sunum / hazırlama
72531
Mikro Plaka
Her biri 8 çukurcuktan oluşan 12 şerit,
T. pallidum rekombinant Antijenler (rAg) ile
kaplı
Spesifik ID numarası = 97
1 plaka
Kullanıma hazır
5 plaka
Kullanıma hazır
1 şişe
70 ml
Seyreltilecek
1 şişe
235 ml
Seyreltilecek
Negatif kontrol
BSA (Bovin Serum Albümin) içeren Tris
Tamponu
Koruyucu: ProClin™ 300 (%0,1)
1 şişe
2,1 ml
Kullanıma hazır
1 şişe
2,1 ml
Kullanıma hazır
Pozitif kontrol (İnsan)
T.pallidum için anti badiler içeren, HIV1/2,
HBs Ag ve HCV için negatif olan, BSA
(Bovin Serum Albümin) içeren bir Tris
tamponunda seyreltilmiş insan serumu
Koruyucu: ProClin™ 300 (%0,1)
1 şişe
1,6 ml
Kullanıma hazır
1 şişe
1,6 ml
Kullanıma hazır
1 şişe
8 ml
Kullanıma hazır
1 şişe
30 ml
Kullanıma hazır
Konsantre Yıkama Çözeltisi (20X)
Tris NaCl Tampon pH 7,4
Koruyucu: ProClin™ 300 (%0,04)
R4
Positive control
R6
Conjugate
Konjuge
T.pallidum rAg / Peroksidaz
Koruyucu: ProClin™ 300 (%0,05)
R8
Substrate
buffer
Substrat tamponu
H2O2 (%0,015) ve DMSO (%4) içeren sitrik
asit ve sodyum asetat çözeltisi pH 4,0
1 şişe
60 ml
Tekrar
sulandırılacak
1 şişe
60 ml
Tekrar
sulandırılacak
R9
Chromogen:
TMB solution
(11X)
Kromojen: TMB çözeltisi (pembe)
3,3’ , 5,5’ tetrametilbenzidin (TMB) içeren
çözelti
1 şişe
5 ml
Seyreltilecek
1 şişe
5 ml
Seyreltilecek
R10
Stopping
solution
1 şişe
28 ml
Kullanıma hazır
1 şişe
28 ml
Kullanıma hazır
Durdurma Çözeltisi
Sülfürik asit çözeltisi (H2SO4 1N)
4.2. Saklama ve kullanma için gerekenler
Bu kit +2-8°C arasında saklanmalıdır. Kitin +2-8°C arasında korunan her kalemi (aksi ifade edilmediği
takdirde) ambalaj üzerinde belirtilen son kullanma tarihine kadar kullanılabilir.
Açıldıktan sonra ve kontaminasyon söz konusu olmadığı takdirde, +2-8°C arasında saklanan R3, R4,
R6, R8, R9 ve R10 reaktifleri etikette gösterilen son kullanma tarihine kadar kullanılabilir.
[TR] 4
Tanımlama
Saklama
R1
+2-8°C arasında saklanan mikro çukurcuk şeritleri vakumlu torba açıldıktan
sonra dikkatle yeniden kapatılan orijinal torbalarında 1 ay boyunca
kullanılabilir.
Seyreltilmiş yıkama çözeltisi 2 hafta boyunca +2-30°C arasında saklanabilir.
Konsantre yıkama çözeltisi (R2) +2-30°C arasında saklanabilir.
R2
R8+R9
Yeniden sulandırma sonrasında, karanlıkta saklanan reaktifler oda
sıcaklığında (18-30°C) 6 saate kadar kullanılabilir.
5. UYARILAR VE ÖNLEMLER
Yalnız in vitro teşhis içindir. Yalnız sağlık profesyonelleri tarafından kullanılmak içindir.
5.1. Sağlık ve Güvenlik önlemleri:
Bu test kiti sadece laboratuar prosedürleri konusunda eğitimli ve olası tehlikeleri bilen kalifiye
personel tarafından kullanılmalıdır. Uygun kıyafetler, eldivenler ve göz/yüz koruma kullanın
ve İyi Laboratuar uygulamaları kurallarına uygun şekilde çalışma yapın.
Test kiti insan kanı bileşenleri içerir. Reaktiflerin hazırlanmasında kullanılan insan kaynaklı
materyaller test edilmiştir ve hepatit B yüzey antijeni (HBs Ag), insan immün yetmezliği (HIV1 ve HIV-2) virüslerine karşı anti badiler ve hepatit C virüsüne (HCV) karşı anti badiler için
reaktif olmadıkları bulunmuştur. Bilinen hiçbir test yöntemi enfeksiyona yol açan maddelerin
yokluğunu tam garanti edemez. Bu nedenle tüm insan kanı türevleri, reaktifler ve insan kanı
örnekleri, enfeksiyon hastalık bulaştırma kapasitesine sahip olarak kullanılmalı, yerel,
bölgesel ve ulusal yönetmeliklerde tanımlanmış kan yoluyla bulaşan patojenler için Evrensel
Önlemler alınarak kullanılmalıdır.
Biyolojik döküntüler: İnsan kaynaklı malzemeler döküldüğünde, potansiyel bulaşıcı oldukları
kabul edilmelidir.
Asit içermeyen döküntüler derhal kontaminasyondan arındırılmalıdır: Döküntü gerçekleşen
bölge, malzemeler ve kontaminasyona maruz kalan yüzeyler ve ekipmanlar, dökülen
numunelerin içerebileceği potansiyel biyolojik tehlikeler üzerinde etkili olan uygun bir kimyevi
dezefektan (1:10 seyreltilmiş çamaşır suyu, %70-80 Etanol veya İzopropanol ve iodofor örn.
%0,5 Wescodyne™ Plus, vd.) ile kontaminasyondan arındırılmalı, ardından silinerek
kurulanmalıdır.
Asit içeren döküntüler uygun bir şekilde emilmeli (silinmeli) veya nötralize edilmeli, alan suyla
yıkanmalı ve silinerek kurutulmalıdır; döküntüyü temizlemek için kullanılan malzemeler
biyolojik atık işlemine tabi tutulması gerekebilir. Daha sonra, bu alan kimyasal
dezenfektanlardan biri ile kontaminasyondan arındırılmalıdır.
NOT: Çamaşır suyu içeren çözeltileri otoklava koymayın!
Tüm örnekleri ve test için kullanılan malzemeleri enfeksiyon unsuru içeriyormuşçasına
bertaraf edin. Laboratuar kimyasalları ve biyolojik olarak tehlikeli atıklar yerel, bölgesel ve
ulusal yönetmeliklere uygun şekilde atılmalıdır.
Bu test kitinde bulunan kimyasal komponentlerle ilgili tehlikeler ve bunlardan korunma
yöntemleri konusunda öneriler için lütfen etiketler üzerinde bulunan ve ayrıca bu kullanım
talimatlarının sonunda yer alan resimli grafiklere başvurun.
Güvenlik Veri Sayfası www.bio-rad.comadresinde bulunabilir.
[TR] 5
5.2. Prosedüre ilişkin önlemler
5.2.1. Hazırlama
Sonuçların güvenilirliği aşağıdaki İyi laboratuar Uygulamalarının uygulanmasına
bağlıdır:
• Son kullanma tarihi geçmiş reaktifleri kullanmayın.
• Bir test çalışması içinde farklı lotlardan gelen reaktifleri karıştırmayın veya ilişkilendirmeyin.
• Kullanmadan önce, reaktiflerin oda sıcaklığında (18-30°C) stabilize olması için 30 dakika bekleyin.
• Testin adı ile test için spesifik tanımlama numarası her mikroplakanın çerçevesinde yazılıdır. Bu
spesifik tanımlama numarası ayrıca her şeritin üzerinde belirtilir.
Syphilis Total Ab: Spesifik ID numarası = 97
Kullanmadan önce spesifik tanımlana numarasını doğrulayın. Tanımlama numarası eksikse ya da test
edilecek analize karşılık gelen numaradan farklı ise, şerit kullanılmamalıdır.
AÇIKLAMA: Yıkama çözeltisi (R2, etiket tanımlama: 20X yeşil renkli), peroksidaz substrat tamponu
(R8, etiket tanımlama: TMB tamponu, mavi renkli), kromojen (R9, etiket tanımlama: TMB 11X, mor
renkli) ve durdurma çözeltisi (R10, etiket tanımlama: 1N kırmızı renkli) için, belirli bir test çalışmasında
aynı lotun kullanılması kaydıyla kitte bulunanlardan başka lotlar kullanılabilir. Bu reaktifler şirketimizin
bazı diğer ürünleriyle kullanılabilir. Ayrıntılı bilgi için teknik servisimize ulaşın.
• Reaktifleri kontaminasyona sebep olmadan dikkatle sulandırın.
• Deiyonize su ile güzelce yıkanmış ve durulanmış cam kaplar veya tercihen tek kullanımlık kaplar
kullanın.
• Mikro plakanın yıkama işleminin sonu ile reaktif dağıtımı arasında kurumasına izin vermeyin.
• Enzim reaksiyonu metal iyonlarına karşı çok hassastır. Buna bağlı olarak, çeşitli konjuge veya
substrat çözeltilerinin herhangi bir metal ile temas etmesine izin vermeyin.
• Geliştirme çözeltisi (substrat tamponu + kromojen) pembe renkli olmalıdır. Bu pembe rengin
sulandırmadan sonra birkaç dakika içerisinde değişmesi reaktifin kullanılamayacağı ve değiştirilmesi
gerektiği anlamına gelir.
Geliştirme çözeltisi, temiz tek kullanımlık plastik tepside veya önceden 1N HCl ile yıkanmış ve distile
su ile tamamen çalkalanmış ve kurutulmuş cam kapta hazırlanabilir. Bu reaktif karanlıkta
saklanmalıdır.
• Konjuge ve geliştirme çözeltisinin dağıtımı için asla aynı kabı kullanmayın.
5.2.2.
İşleme
• Test prosedürünü değiştirmeyin.
• Testleri reaktif buhar (asit, alkalin, aldehit buharları) veya konjugenin enzim aktivitesini
değiştirebilecek tozların bulunduğu ortamlarda yapmayın.
• Her örnek için yeni dağıtım ucu kullanın.
• Çukurcuk yıkaması bu prosedürün kritik bir adımıdır: tavsiye edilen sayıda yıkama döngüsüne uyun
ve tüm çukurcukların önce tamamen dolduğundan, sonra tamamen boşaldığından emin olun. Yanlış
yıkamalar doğru olmayan sonuçlara yol açabilir.
• Maksimum test performansını elde etmek için tarif edilen yıkama prosedürlerini dikkatle takip edin.
Negatif numune için kabul edilebilir bir optik yoğunluk altyapısı elde etmek amacıyla yıkama
prosedürünün bazı araçlar ile iyileştirilmesi (yıkama adımı döngüsü sayısının ve/veya her döngü için
yıkama tamponu hacminin artırılması) gerekebilir.
• Uyarlamalar ve özel prosedürler için şirketimize ulaşın.
6. ÖRNEKLER
Güncel uygulamalara göre bir kan numunesi alın.
Testler, (EDTA, Sodyum Sitrat, Sodyum Heparin veya ACD üzerinde toplanan) seyreltilmemiş serum
veya plazma üzerinde gerçekleştirilmelidir.
Agregalar içeren örnekler test öncesinde santrifüj ile arıtılmalıdır. Numuneler, test 7 gün içerisinde
gerçekleştirilecekse +2-8°C'de, daha uzun süreler için ise -20°C'de saklanmalıdır. Beşten fazla
dondurma/eritme döngüsü tekrarlamayın. 1/2 saat boyunca 56°C'de ısıl işlem gören numuneler
kullanılabilir.
[TR] 6
En fazla 120 g/l albümin, 200 mg/l bilirubin, 33 g/l triolein veya 2 g/l of hemoglobin içeren numuneler
sonucu etkilemez. Bununla beraber, hiperlipemik veya hiperhemolize serum veya plazma kullanılması
önerilmez.
Numuneler test edilmeden önce eritilmelidir ve iyice karıştırılmalıdır.
Numuneler nakledilecekse, etiyolojik ajanların taşınmasıyla ilgili olarak geçerli düzenlemeler uyarınca
paketlenmelidir ve tercihen donmuş halde nakledilmelidir.
7. PROSEDÜR
7.1. Gerekli olan ama sağlanmamış malzemeler
• Distile su.
• Sodyum hipoklorit (çamaşır suyu) ve sodyum bikarbonat.
• Emici kağıt.
• Tek kullanımlık eldivenler.
• Koruyucu gözlük.
• Tek kullanımlık tüpler.
• Otomatik veya yarı otomatik, ayarlanabilir veya önceden ayarlı, pipetler ya da çoklu pipetler, 50 μl, 1
ml ve 10 ml ölçmek ve vermek için.
• 100 ml ve 1L kapasiteli dereceli silindirler.
• Otomatik, yarı otomatik veya manuel mikro plaka yıkama sistemi (*).
• Termostatik olarak 37°C±1°C şeklinde ayarlanmış mikro plaka inkübatörü (*).
• Biyolojik olarak tehlikeli atıklar için konteyner.
• 450 nm, 490 nm ve 620-700 nm filtrelere sahip mikro plaka okuyucu (*).
(*) Teknik departmanımız tarafından önerilen ekipman hakkında ayrıntılı bilgi için bize ulaşın.
7.2. Reaktif hazırlama
7.2.1. Kullanıma hazır reaktifler
Reaktif 1 (R1): Mikro Plaka
12 şerit içeren her çerçeve desteği kilitli bir folyo torbaya sarılıdır. Bir makas veya bisturi kullanarak
kilidin 0,5 ila 1 cm üstünden torbayı kesin. Torbayı açın ve çerçeveyi çıkartın. Kullanılmayan şeritleri
yeniden torbaya koyun. Torbayı dikkatlice kapatın ve yeniden +2-8°C sıcaklığında saklayın.
Reaktif 3 (R3): Negatif kontrol
Reaktif 4 (R4): Pozitif kontrol
Reaktif 6 (R6): Konjuge
Kullanmadan önce ters çevirerek homojenize edin.
Reaktif 10 (R10): Durdurma Çözeltisi
7.2.2. Sulandırılacak reaktifler
Reaktif 2 (R2): Konsantre yıkama çözeltisi (20X)
Kullanıma hazır yıkama çözeltisi elde etmek için 1:20 distile suda seyreltin.
12 şeritlik bir plaka için 800 ml hazırlayın.
Reaktif 8 (R8) + Reaktif 9 (R9): Enzim geliştirme çözeltisi
12 şerit üzerinde işlem yapmak için 10 ml gerekli ve yeterli olduğunu dikkate
alarak Substrat Tamponunda 1:11 kromojen (R9) seyreltin (ör. 1 ml reaktif R9
+10 ml R8 reaktif). Homojenize edin.
7.3. Test Prosedürü
Prosedüre harfiyen uyun.
Test kalitesini doğrulamak üzere her bir test için negatif ve pozitif kontrol serumu kullanın.
[TR] 7
Aşağıdaki İyi Laboratuvar Uygulamalarına uyun:
1) Numune dağıtım ve tanımlama planını dikkatli bir şekilde oluşturun.
2) Seyreltilmiş R2 yıkama çözeltisini hazırlayın
3) Destek çerçevesini ve gereken sayıda şeridi (R1) koruyucu ambalajdan çıkarın. Kullanılmayan
şeritleri yeniden ambalajlarına koyun. Ambalajı kapatın ve yeniden +2-8°C arasında saklayın.
4) Aşağıdaki sırada çukurcuğa dağıtın (tavsiye edilen plaka dağılımı):
• A1, B1, C1'e 50 μl negatif kontrol (R3)
• D1, E1'e 50 μl pozitif kontrol (R4)
• F1, G1, vb. her çukurcuğa 50 µl seyreltilmemiş numune
• Her çukurcuğa 50 μl konjuge (R6)
Kullanılan sisteme bağlı olarak kontrollerin pozisyonunun veya dağıtım sırasının değiştirilmesi
mümkündür.
Reaksiyon karışımını en az 3 aspirasyonla veya mikroplaka çalkalayıcı ile 5 saniye homojenize
edin.
AÇIKLAMA:
Numune ve kontrol dağılımı manipülasyonun bu aşamasında görsel olarak kontrol edilebilir, boş
çukurcuk ve numune içeren çukurcuk arasında bir renk farkı vardır.
Numune dağıtımından sonra konjugeyi 5 dakika içerisinde verin. Boş bir çukurcuk ve kırmızı
konjuge çözeltisini (R6) içeren çukurcuk arasında açık bir renk farkı vardır (Bkz. § 7.7)
5) Mümkün olduğunda plakayı yeni yapışkan bant ile kaplayın.
6) Mikroplakayı 30 - 35 dakika boyunca 37°C ± 1°C'e inkübe edin.
7) Gerektiği takdirde yapışkan bandı çıkarın. Bütün çukurcukların içeriğini bir sıvı atık
konteynerine aspire edin ve her çukurcuğa minimum 370 µl yıkama çözeltisi ilave edin.
Yeniden aspire edin ve yıkamayı en az 4 kez tekrar edin (Toplam 5 yıkama döngüsü). Kalıntı
hacim 10 µl'den düşük olmalıdır (gerektiği takdirde şeritleri emici kağıt üzerinde ters çevirerek
kurutun).
Otomatik bir yıkayıcınız varsa, aynı çalışma döngüsünü izleyin.
AÇIKLAMA: 20 dakika içerisinde yıkama adımına geçin.
8) Geliştirme çözeltisini (reaktif R8 + R9) hazırlayın.
9) Her çukurcuğa hızla kullanmadan önce taze olarak hazırlanmış, 50 μl hazır geliştirme çözeltisi
(R8+R9) verin. Reaksiyonun karanlık ortamda ve oda sıcaklığında (18-30°C) 25 - 35 dakika
gelişmesine izin verin. Bu inkübasyon sırasında yapışkan bant kullanmayın.
AÇIKLAMA: Pembe geliştirme çözeltisinin dağıtılması manipülasyonun bu aşamasında görsel
olarak kontrol edilebilir. Boş bir çukurcuk ve pembe substrat çözeltisini içeren çukurcuk arasında
açık bir renk farklı vardır. (Bakınız § 7.7).
10) Substrat çözeltisi ile aynı diziyi ve dağıtım hızını kullanarak 50 μl durdurma çözeltisi (R10)
ilave edin. Reaksiyon karışımını homojenize edin.
AÇIKLAMA: Renksiz durdurma çözeltisinin dağıtılması bu işleme aşamasında görsel olarak
kontrol edilebilir. Substrat rengi olan pembe (negatif numuneler için) veya mavi (pozitif numuneler
için), durdurma çözeltisi ilave edildikten sonra renksiz (negatif numuneler için) veya sarı (pozitif
numuneler için) hale gelen çukurcuklardan kaybolur.
11) Her bir plakanın altını dikkatle silin. Durdurma çözeltisinin ilavesinden sonra en az 4 dakika
bekleyin ve reaksiyonun durdurulmasından itibaren 30 dakika içerisinde bir plaka okuyucu
kullanarak 450/620-690 nm'deki optik yoğunluğu okuyun.
12) Spektrometrik ve görsel okumalar ile uyuşma için ve plakaya ve numune dağıtımına ve
tanımlama planına karşı kontrol gerçekleştirin.
7.4. Kalite Kontrol
Testlerin sonuçlarını doğrulamak üzere her çalıştırma için negatif (R3) ve pozitif (R4) kontrolleri
kullanın. (Bkz. §7.5)
[TR] 8
7.5. Test Doğrulama kriterleri
Aşağıdaki şartlara uyulursa bu test doğrulanır:
1) Negatif kontrol R3 için:
OD R3 ≤ 0,080
Bir kontrol değeri bu değerin üzerindeyse, bunu dikkate almayın ve kalan iki negatif kontrol değeri ile
hesaplamayı gerçekleştirin.
2) R4 pozitif kontrolü için:
OD R4 ≥ 0.700
7.6. Sonuçların Hesaplanması / Yorumlanması
Kesme, R3 negatif kontrolü ile belirlenir:
Negatif kontrol R3 için ortalama ölçülen absorbans değerini ve Kesme Değerini (COV) aşağıdaki
şekilde hesaplayın:
COV = Ortalama OD R3 + 0,100
COV'den düşük OD'ye sahip numuneler Syphilis Total Ab tarafından negatif sayılır.
Ancak kesme değerinin hemen altındaki sonuçlar (COV -%10 < OD < COV) dikkatle yorumlanmalıdır.
Sistemler ve laboratuvar prosedürleri izin verdiğinde karşılık gelen numunelerin iki kez yeniden test
edilmesi tavsiye edilir.
OD'nin COV'a eşit veya COV'dan yüksek olduğu numuneler Syphilis Total Ab tarafından pozitif sayılır
ve nihai yorumlama öncesinde iki kere test edilmelidir.
En az bir tekrarda COV'den yüksek çıkan tekrar test edilmiş numuneler pozitif sayılır ve daha ayrıntılı
incelenmelidir. Her iki tekrarda Kesme değerinin altında çıkan numuneler negatif sayılır.
Test edilen numuneler için çok düşük optik yoğunluk (negatif OD) halinde ve numuneler ile reaktifin
mevcudiyeti kontrol edildiğinde, sonuçlar negatif olarak yorumlanabilir.
Pozitif numunelerin güncel ulusal tavsiyelere ve algoritmalara uyarak doğrulanması önerilir.
7.7. Numune ve konjuge pipetlemenin (isteğe bağlı) spektrometrik doğrulaması
Numuneler ve kontroller
Çukurcukta numunelerin ve kontrollerin mevcudiyeti 450 / 620 nm'de otomatik okuma ile
doğrulanabilir.
Bir numunenin ilave edildiği bir çukurcuk 0,050 ve 1,100 arasında bir OD'ye sahip olacaktır.
Konjuge
Konjuge kırmızı renklidir.
Çukurcukta konjugenin mevcudiyeti 450 / 620 nm'de otomatik okuma ile kontrol edilebilir. Bir
numunenin ilave edildiği bir çukurcuk 1,200'den yüksek veya buna eşit bir OD'ye sahip olacaktır.
Geliştirme çözeltisi pipetleme doğrulaması
Çukurcukta pembe geliştirme çözeltisi mevcudiyetinin 492 nm'de otomatik okuma yoluyla
doğrulanması mümkündür.
Geliştirme çözeltisi içeren bir çukurcuğun optik yoğunluk değeri 0,100'den büyük veya buna eşit
olmalıdır (düşük bir optik yoğunluk geliştirme çözeltisinin zayıf dağılımını gösterir).
8. TEST KISITLAMALARI
Sifilis için yapılan bütün serolojik testlerde olduğu gibi, genel bir klinik teşhis oluşturmak için Syphilis
Total AB EIA testi ile elde edilen sonuçların yorumlanması hastanın klinik semptomları, tıbbi geçmişi
ve diğer laboratuvar bulguları ile beraber kullanılmalıdır.
[TR] 9
Hastalığın her aşaması için tek bir test veya belirli bir referans standardı mevcut değildir. Dolayısıyla,
sifilis teşhisi ağırlıklı olarak hem nontreponemal hem de treponemal yöntemlerden elde edilen
sonuçları gerektiren serolojik teste dayanır.
Hiçbir teşhis testi bir numunenin enfeksiyonun çok erken aşamalarında mevcut olanlar gibi düşük
seviyelerde T. pallidum anti badileri içermediğine dair mutlak teminat vermez. Dolayısıyla, herhangi
bir zamanda elde edilen negatif bir sonuç sifilis enfeksiyonuna maruz kalma olasılığını ortadan
kaldırmaz.
Herhangi bir ELISA tekniği yalancı pozitif sonuçlar verebilir. Tekrarlanabilir pozitif olduğu bulunan
herhangi bir numunenin reaksiyonunun spesifikliğinin uygun bir yöntem kullanılarak Syphilis Total Ab
kiti kriterlerinin yorumlanmasına göre kontrol edilmesi önerilir: Treponema pallidum Hemaglütinasyon
testi.
Treponemal enfeksiyondan sonra bütün treponemal test sonuçları reaktif kalma eğilimindedir,
dolayısıyla terapiye yanıtı değerlendirmek için bunlar kullanılmamalıdır. Reaktifliğin sürekliliğinden
dolayı, genellikle hastanın ömrü boyunca treponemal testler reaktif sonuç elde edilmiş bir hastada
yineleme veya yeniden enfekte olma tespiti konusunda değersizdir. Bu durumda, diğer testlerin
kullanılması önerilir: Sifilis IgM EIA, RPR ve TPHA.
Numuneyi, konjuge geliştirme solüsyonu birikimini doğrulama amaçlı spektrometrik yöntem,
numunelerin ve konjugenin dağıtılan hacminin doğruluğunu teyit etmeye izin vermez. Bu yöntem
yalnızca numunenin ve konjugenin mevcudiyetini gösterir. Bu yöntem ile hata oranı kullanılan sistemin
doğruluğu ile yakından bağlantılıdır (dağılım ve okuma için %10'un üzerinde bir toplu sapma katsayısı
bu adımın kalitesini önemli ölçüde düşürecektir).
9. PERFORMANS KARAKTERİSTİKLERİ
9.1. Hassasiyet Ölçümü
Farklı konsantrasyonlarda Sifilis anti badileri içeren numuneler kullanılarak tekrarlanabilirlik ve ara
hassasiyet belirlenmiştir. Tekrarlanabilirliği belirlemek üzere numuneler aynı test serisi boyunca 30
kere test edilmiştir.
Numuneler ayrıca 20 gün boyunca günde 2 test hızı ile ikişer kez test edilmiştir.
Oran ortalaması, standart sapmalar ve Sapma Katsayıları (CV) hesaplanmıştır.
9.1.1. Tekrarlanabilirlik:
N
Oranların
ortalaması
Standard
sapma
%CV
Düşük Negatif
30
0,14
0,014
%9,5
Yüksek Negatif
30
0,68
0,051
%7,5
Düşük pozitif Sifilis ab
30
1,90
0,070
%3,7
Pozitif Sifilis ab
30
3,76
0,130
%3,5
Numuneler
Pozitif numunelerden elde edilen CV'ler %10'dan düşüktür.
[TR] 10
9.1.2. Ara Hassasiyet
Numuneler
N
Oranların
ortalaması
Test içi
Testler /
operatörler
arası
Günler arası
Toplam
tekrarlanabilirlik
SS
%CV
SS
%CV
SS
%CV
SS
%CV
Düşük Negatif
80
0,15
0,035
%22,5
0,023
%14,7
0,017
%10,9
0,045
%29,0
Yüksek Negatif
80
0,74
0,038
%5,1
0,074
%10,0
0,006
%0,8
0,084
%11,2
Düşük pozitif Sifilis
ab
80
2,30
0,112
%4,9
0,312
%13,5
0,099
%4,3
0,346
%15,0
Pozitif Sifilis ab
80
4,13
0,180
%4,3
0,543
%13,1
0,195
%4,7
0,604
%14,6
Pozitif numunelerden elde edilen CV'ler %15'ten düşüktür veya %15'e eşittir.
9.2. Klinik Performans
Syphilis Total AB testinin klinik performansı, prospektif ve retrospektif çalışmalardan elde edilen test
numuneleri ile belirlenmiştir:
Prospektif çalışma:
- Rastgele kan donörlerinden alınan 5195 numune;
- Sifilis şüphesi bulunan hastalardan 460 numune
Retrospektif çalışma:
- STD hastalarından 350 pozitif.
Çalışmalar 2 kan verme alanında, bir STD (Cinsel Yolla Bulaşan Hastalık) merkezinde ve Bio-Rad
sahasında yürütülmüştür.
9.2.1. Teşhis Spesifikliği
Çalışma, Fransa'daki 2 kan bankasından veya rastgele donörlerden alınan serum ve EDTA plazma
numuneleri üzerinde yürütülmüştür.
Ayrıca, hastalardan alınan numuneler üzerinde bir spesifiklik çalışması yürütülmüştür.
Sonuçların tamamı CE işaretli Sifilis testleri kullanılarak elde edilenlerle kıyaslanmıştır.
Tablo 1: Spesifiklik Testi (IR = Başlangıçta Reaktif; RR= Tekrarlayan Reaktif)
Merkeze
göre
Kan
donörleri
Hasta
Tesis
#1 + #2
#3
Toplam
örnek
sayısı
Başlangıçt
a Reaktif
(IR)
Tekrarlaya
n Reaktif
(RR)
RR
Spesifikliği
(%)
Serum SST
3127
2
2*
3125/3125
Plazma EDTA K2
2068
2
2*
2066/2066
Toplam
5195
4
4*
Serum
351
1
1
Numune tipi
%100
5191/5191
%99,72
350/351
%95 CI (%)
%99,93 %100
%98,42 –
100
*Diğer CE işaretli EIA
Sifilis testleri ile pozitif bulunan Tekrarlayan Reaktif numuneler teşhis
spesifikliği hesaplamasının dışında tutulmuştur
[TR] 11
9.2.2. Teşhis Duyarlılığı
Retrospektif çalışma:
Çalışma, arasında 2 numunenin negatif ilan edildiği ve 348'inin pozitif olduğunun doğrulandığı 350
donmuş numune üzerinde CE işaretli Sifilis testleri ile gerçekleştirilmiştir.
Bu 348 pozitif numune arasında, 7 numune enfeksiyonun başlangıç aşamasındaki hastalardan
alınmıştı.
348 numunenin tamamı Bio-Rad Syphilis Total Ab testi ile pozitif bulunmuştur.
Prospektif çalışma:
Bio-Rad Syphilis Total Ab testi ile toplam 460 taze numune değerlendirilmiştir ve CE işaretli Sifilis
testleri ile karşılaştırılmıştır.
348'i hem Bio-Rad hem de referans testler ile negatif bulunmuştur (iki numune referans EIA testi ile
yalancı pozitif çıkmıştır)
109'u her iki test ile pozitif bulunmuştur.
3 numune çelişkili sonuçlar göstermiştir (Bio-Rad test ile yeniden test etme sonrasında):
• 1 numune Bio-Rad Testi ile pozitif, referans testlerle ise yüksek negatif. Düşük sifilis oranına
sahip bu numune her iki EIA testi için limit kesme değerindeydi:
• 1 numune referans testler ile pozitif, Bio-Rad testi ile negatif (belirti göstermeyen 1 hastadan)
• 1 numune referans testler ile pozitif, Bio-Rad testi ile negatif IR ve yeniden testtte pozitif,
Retrospektif ve Prospektif çalışmalar:
Global teşhis hassasiyeti %99,56'ya eşit olup (457/459) güven aralığı %95'tir [%98,44 - %99,95].
Klinik hassasiyet
3 ticari panel ve 1 serokonversiyon paneli üzerinde klinik hassasiyet çalışması da yapılmıştır. Bio-Rad
Syphilis Total Ab testi bir CE işaretli sifilis testi ile karşılaştırılmıştır. Her bir panel numunesinin tespiti
Bio-Rad testi ve sifilis referans testi arasında eşdeğerdir.
9.3. Analitik Hassasiyet
Analitik hassasiyet 2 NIBSC Standardı üzerinde değerlendirilmiştir ve regresyon kullanılarak kesme
değeri üzerinden hesaplanmıştır:
1. IgG / IgM için tespit limiti 3 lot Syphilis Total Ab testi üzerinde değerlendirilmiştir ve WHO
Standardı IgM/IgG (NIBSC kodu: 05/132) kullanılarak CI %95 [0,10 mIU/ml – 1,30 mIU/ml] ile
0,53 mIU/ml olarak öngörülmüştür.
2. IgG için tespit limiti 1 lot Syphilis Total Ab testi üzerinde değerlendirilmiştir ve WHO Standardı
IgM/IgG (NIBSC kodu: 05/122) kullanılarak CI %95 [0,02 mIU/ml – 0,27 mIU/ml] ile 0,11
mIU/ml olarak öngörülmüştür.
9.4. Analitik Spesifiklik / Çapraz Reaktivite Çalışması
Enfeksiyon hastalıklara (Lyme, Toksoplazmoz, EBV, Leptospiroz, SLE (lupus), Hepatit A Anti badi,
Hepatit B Anti badi, Hepatit C Anti badi, HTLV I/II, ve HIV) yol açabilecek patojenlere karşı anti badiler
içeren toplam 125 potansiyel interferans testi risk altındaki hasta grubundan (hamile kadınlar veya çok
doğurkan kadınlar) alınan numuneler veya immün sistem bozuklukları (romatoid faktörler) bulunan
hastalardan alınan numuneler Syphilis Total Ab testi ile test edilmiştir.
Test edilen 125 numune arasında Syphilis Total Ab testi ile 1 örnek pozitif tekrarlanabilir olarak
bulunmuştur; bu numune diğer CE Syphilis EIA ve doğrulayıcı testleri ile gerçek pozitif olarak
doğrulanmıştır.
Bu hedef kitlede gözlemlenen spesifiklik %100'e (124/124) eşit olup güven aralığı %95'tir [%97,1 %100,0].
9.5. Kanca Etkisi
6 Sifilis pozitif numuneyi farklı seyreltilerde yüksek titrasyonla test ederek olası bir kanca etkisinin
mevcudiyeti araştırılmıştır. Seyreltilmemiş ve seyreltilmiş numuneler arasında gözlenen sonuçların
eşdeğerliği test edilen numunelerde kanca etkisinin bulunmadığını gösterir.
[TR] 12
10. BİBLİYOGRAFİ VE REFERANSLAR.
1. Levinson SS. The Nature of Heterophilic Antibodies and Their Role in Immunoassay Interference.
J. Clin. Immunoassay 15: 108-115,1992.
2. Norris S.J. Plypeptides of Treponema pallidum: Progress toward understanding their structural,
functional and immunological role. Microbiological Reviews, Setpt. 1993 Vol 57.
3. Larsen SA, Steiner BM, and Rudolph AH. Laboratory diagnosis and interpretation of tests for
syphilis. Clin Microbiol Rev. 1995 Jan; 8(1):1–21.
4. Zrein M, Maure I, Boursier F, Soufflet L. Recombinant antigen-based enzyme immunoassay for
screening of Treponema pallidum antibodies in blood bank routine. J Clin Microbol. 1995 Mar;
33(3):525–7.
5. Singh AE and Romanowski. Syphilis: Review with emphasis on clinical, epidemiological, and
some biologic features. Clin Microbiol Rev. 1999 Apr; 12(2):187–209.
6. Stability of selected serum proteins after long-term storage in the Janus Serum Bank. Clin Chem
Lab Med. 2009. 47:596-606.
7. International Journal of STD & AIDS 2009; 20: 300–309.
8. Screening donated Blood for Transfusion-Transmissible infections. World Health Organization.
2009
9. M. J. Loeffelholz, and M. J. Binnicker, ‘It Is Time to Use Treponema-Specific Antibody Screening
Tests for Diagnosis of Syphilis’, J Clin Microbiol, 50 (2012), 2-6.
[TR] 13
[TR] 14
[TR] 15
[TR] 16
Bio-Rad
3, boulevard Raymond Poincaré
92430 Marnes-la-Coquette France
Tel.: +33 (0) 1 47 95 60 00
Faks: +33 (0) 1 47 41 91 33
www.bio-rad.com
2014/11
883679
[TR] 17