VOGES PROSKAUER TESTİ

VOGES PROSKAUER
TESTİ
HAZIRLAYANLAR
Gamze ÖZLÜ (040559023)
Prof. Dr. Figen ERKOÇ
Gazi Eğitim Fakültesi
• Bu test, bazı mikroorganizmaların glukozu fermente
ederek, nötral bir ürün olan acetylmethylcarbinol'u
(acetoin) meydana getirme yeteneğini tayinde ve
özellikle Enterobacteriacea familyasındaki bazı bakteri
türlerinin [Klebsiella pneumoniae (+), E. coli (-)]
identifikasyonunda kullanılır. Glukoz, önce pirüvik asit'e
metabolize olur. Pirüvik asit, glikolizde en önemli kilit
intermediyerdir (ara ürün). Pirüvik asidin yıkılması, ilgili
bakternin türüne göre aerobik veya anaerobik yolla olur.
Glukozun fermentasyonu sonu acetoin ve bunun nötral
bir redüksiyon ürünü olan 2,3-butanediol da
(CH3.CHOH.CH3) meydana gelmektedir.
• NOT: Metil red, fenol red’den (fenol kırmızısı) farklıdır
çünkü pH 6.2 ve üstünde sarı; pH 4.4 ve altında
kırmızıdır. Fenol kırmızısı
pH 6.8’nın altında sarıya
döner.
Bu
iki
indikatörü
karıştırırsanız,
testi
değerlendirmede zorlanırsınız.
• Voges Proskauer testi (VP) ile metil red testi (MR),
ortamlarının aynı olması nedeniyle birlikte uygulanabilir.
Her ikisi de IMViC testinin birer parçasıdır. Metil red
pozitif olanlarda (organik asit fazla olmasından dolayı),
VP reaksiyonu negatif olabilir. Nötral ürünler meydana
gelmeyebilir (genel bir kural değil). İlk başlangıçta MR
testi pozitif görülebilir. İnkübasyon süresi uzarsa acetoin
oluşabilir. Bütilen glikol metabolik yolunu kullanan
bakteriler acetoin üretir. Bütilen glikol metabolik yolunu
kullanan organizma ekilen MR-VP broth’a VP reaktifleri
eklenince KOH varlığında son ürün olan acetoin,
diasetil’e dönüşür. Kreatin de reaktifde katalizör olarak
bulunur. Diasetil kırmızı rengi oluşturur.
• Dolayısıyla kırmızı renk pozitif sonuç olarak kabul edilir.
Reaktifler eklendikten sonra bakır rengi oluşursa test
negatiftir.
Voges Proskauer Testi
Kaynaklar: http://www.vet.chula.ac.th/~vph/lecture5.pdf
http://www.mc.uky.edu/oaa/curriculum/iid98/manual/00labtoc.htm
VP pozitif sonuç
Materyal
• MR/VP besi yeri (Clark-Lubs, pH 6, 9,5
ml).
2) Mikroorganizmaların saf ve taze
kültürleri.
3) Kontrol, pozitif (E. cloacae, K.
pneumoniae) ve negatif (E. coli)
suşlarının
kültürleri
4) O'Meara ayıracı (veya Barzit VP
ayıracı).
5) Ekilmemiş besi yerleri.
Metod
İçinde glukoz bulunan tamponlu besi
yerine kültürlerden ekilir ve 37°C’de 2-7
gün inkübe edilir.
Bu sürenin sonunda kültürlere ve
ekilmemiş tüplere indikatörden (O'Meara)
1 ml ilave edilerek hafifçe çalkalanır ve su
banyosunda (37°C’de) 4 saat tutulur.
Aralıklı olarak hafifçe çalkalanır.
Değerlendirme
Besi yerinin üstünde 2-5 dakika içinde
pembe rengin oluşumu, acetoin varlığını
ortaya koyduğundan pozitif reaksiyon olarak
kabul edilir. Eğer sarı renk meydana gelirse
negatif olarak dikkate alınır. O'Meara testi,
ortamda oluşan acetoin'e bağlıdır. Bu madde
de, oksijenin bulunduğu durumda alkali
ortamda
okside
olur
ve
diasetil
(CH3.CO.CO.CO3) meydana gelir. Bu son
madde de, kreatin'le reaksiyona girerek
pembe renk meydana getirir.
Kırmızı renk pozitif sonuç
Pembe renk pozitif sonuç
Dikkat edilecek noktalar
Reaktifler kullanılmadan önce iyice
kontrol edilmelidir.
Bazen reaktif ilavesinden 1 saat sonra
bakır renkli gibi bir görünüm meydana
gelebilir.
Negatif
olarak
dikkate
alınmalıdır.
Et infüzyon broth, içinde acetoin ve
diasetil bulunabilmesinden dolayı tercih
edilmemelidir.
Bazı bakterilerde V-P testi sonuçları
TEST SUŞU
ÜREME
METİL RED
VOGES
PROSKAUER
Escherichia coli
ATCC 25922
iyi / çok iyi
+
-
Klebsiella
pneumoniae ATCC
13883
iyi / çok iyi
+
-
Klebsiella
pneumoniae ATCC
10031
iyi / çok iyi
+
-
Enterobacter cloacae
ATCC 13047
iyi / çok iyi
-
+
Serratia marcescens
ATCC 14756
iyi / çok iyi
+
-
+
•
•
•
•
KAYNAKLAR:
www.mikrobiyoloji.org
http://www.mc.uky.edu/oaa/curriculum/iid9
8/manual/00labtoc.htm
http://www.emdchemicals.com/analytics/M
icro_Manual/TEDISdata/prods/1_05712_0
500.html (tablonun alındığı kaynak)
http://www.vet.chula.ac.th/~vph/lecture5.p
df