Farklı Biyokimyasal Testler HCVFAT ® : FibroTest® ve ActiTest

Fibroz ve Aktivite indeksleri sırasıyla karaciğer fibrozu ve nekroinflamatuvar aktivitesi değerlendirmesini mümkün
kılar. Bu indeksler Kronik Hepatit C'li hastalarda karaciğer biyopsisine alternatif olarak değerlendirilmektedir.
FAT ® testi fibroz ve nekroinflamatuvar aktivite test sonuçlarını bir rapor formatında verir.
HCVFAT ® indeks testleri sonuçları biyokimyasal parametrelerin test sonuçlarından türetilmektedir. Patentli
HCV
olan bu indeksleri hesaplayan algoritmalar faklı klinik çalışmalarda tanımlanmış ve valide edilmiştir.
FAT
® testini oluşturan FibroTest® ve ActiTest® testlerine ilişkin biyokimyasal parametrelerin
HCV
testleri referans medodlara veya referans materyale göre standardize edilmiş metodlar kullanılarak
yapılmıştır.
Biyolojik analiz laboratuvarlarında çalışan sağlık profesyonellerinin hesaplanan Fibroz ve Aktivite indekslerinden
beklenen faydayı temin edebilmesi için farklı testlerin yapılmasına ilişkin ve bu dökümanda belirtilen kriterlere
uymalıdır. Bu kriterler kanın kendisine , analitik metoda ve kalibrasyonuna ve testlerinin güvenilirliğine ilşkin
kriterlerdir.
Bu kriterler bu dökümanda tanımlanmıştır
Farklı Biyokimyasal Testler
Fibrotest 5 biyokimyasal testi birleştirmektedir.
-alpha 2 – macroglobulin
-haptoglobin
-apolipoprotein A1
-gamma-GT (gamma glutamyl transpeptidase)
-total biluribin
Actitest yukarıdaki 5 test ile beraber ALT (Alanine aminotransferase) testini birleştirmektedir. Eğer Actitest testi
talep edilmiyorsa ALT değeri yerine 3333 girilmelidir.
Cinsiyet ve yaşa göre (algoritma tarafından) ayarlanan sonuçlar Fibroz ve Aktivite indekslerini hesaplamakta
kullanılır.
HCV
FAT ® : FibroTest® ve ActiTest®
biyokimyasal parametreleri
ölçümünde Pre-analitik safha
Kan Örneği
Kan 12 saatlik açlıkta hastadan venöz olarak alınır.Kan örneği antikoagulansız 5ml veya 7ml tüpe alınır (kırmızı
kapaklı düz tüp).
Serum örnekleri kan alınmasından 2 saat içerisinde , ve koagulasyon sonrasında santrifüj yapılarak ayrıştırılır.
Santrifüj koşulları, hız ve zamanlama için tüp üreticisinin kriterlerine uyulmalıdır.
Saklama ve nakliye koşulları , analiz öncesi ön işlem.
Biyokimyasal testler genellikle taze serumda çalışılır. Serum dekante edilebilir ve ışıktan korunaklı olarak +2 ve +8
santigrad derecede 72 saat saklanabilir.
Spesifik proteinler (alpha2-macroglobulin , haptoglobulin ve apolipoprotein A1), +2 ve +8 santigrad derecede 5 gün
saklanan serumda çalışılabilir.
Çalışılması 5 gün ötesinde ileribir tarihe ertelenen protein testlerinde serum dondurularak -80 santigrat derecede
saklanmalıdır.
Diğer parametrelerin aksine ALT aktivite ölçümleri çözülmüş serum örneğinde çalışılamaz.
Dondurma ve çözülme işlemi sadece bir kez yapılabilir.
Laboratuvar sıcaklığında çözülmüş serum 10 dakika süreyle 1500 g de santrifüj edilmelidir.
Uygulama Kriterleri-2
Enterferans
Lipit ve hemoliz ölçümlere enterferans etkisi yapmaktadır. Hafif derecede lipemik serum daima standart metodların
kriterlerine uygun olarak sulandırılabilir. Hemolizli ve/veya hiperlipemik serumlar red olunmalıdır.
FAT
HCV
® : FibroTest® ve ActiTest® parametre testleri
FibroTest® ve ActiTest® test metodlarının çalışmaları aşağıda belirtilen şartlarda ve analizörlerde teyid edilmiştir.
Bu şartlar ve analizörlerde çalışma , fibroz ve aktivite indekslerinin sonuçlarının kalitesinin garantisidir.
Spesifik Protein Testleri
Immunonephelemetric metodlar: alpha2-macroglobulin, haptoglobin, ve apolipoprotein A1 testleri BN2 veya
BNProspec analizörlerinde (Dade Behring society) çalışılmıştır. Reaktifler Dade Behring ürünleridir.
Immunoturbidimetric metodlar: haptoglobin ve apolipoprotein A1 testleri Integra400 analizöründe
çalışılmıştır.ROCHE Diagnostics reaktifleri kullanılmıştır. Dahili ve dış kalite kontrol ROCHE Diagnostics
kullanılmıştır.
Alpha2-macroglobulin ve haptoglobin analiz ölçümleri CRM 470 referans materyali kullanılarak standardize
edilmiştir. CRM 470: BCR (Community Burean of Refarence IFCC (the international Federation of Clinical
Chemistry) ve CAP (the College of American Pathologists)tarafından sertifikalıdır. (3)(4)
ApolipoproteinA1 testi WHO-IFCC SPI-01 referans materyali kullanılarak standardize edilmiştir. (WHO-IFCC SP
-01: World Health Organization -International Federation of Clinical Chemistry SP1-01). (5)
Gamma – GT ve ALT
Analizörler: Hitachi 917, Modular, Integra400 (Roche Diagnostics Society) ; reaktifler
Roche Diagnostics Society.
Enzimatik aktivite ölçümleri 37 santigrad derecede çalışılmış ve CFAS kalibatörü (Calibrator For Automated
Systems-Roche Diagnostics Society) ile kalibre edilmiştir. (6)(7)
-Gamma –GT; Orjinal Szasz metoduna standardize edilmiş Szasz enzimatik metodudur. (8)
-ALT: IFCC Standart enzimatik metod (9)
Dahili kalite kontrolü ve dış kalite kontrolü :Roche Diagnostics Society
3 farklı analizör arasındaki karşılaştırma sonıçları yüksek uyumluluk göstermiştir.
Enzim aktivitesi U/L (Units Per Liter) birimi ile raporlanmıştır.
Uygulama Kriterleri-2
Notlar:
CFAS kalibratörünün farklı parametreler için değerleri referans metodlara göre veya referans
standartlar kullanılarak belirlenmiştir.
Analizörün ilk kalibrasyonu yapılmamışsa , ölçümlerin doğruluğunun kontrolünün laboratuvar
uygulamalarında rutin olarak yapıldığı gibi çalışılması önemlidir. Bu doğruluk kontrolü CFAS
deki gamma -GT ve ALT ölçümlerinin diğer serumlarda olduğu gibi çalışılması ile yapılmıştır.
CFAS değerleri ve lot numaraları , HCVFAT ® : FibroTest® ve ActiTest® 'e ilişkin diğer test
sonuçları ile birlikte belirtilmelidir.
Total bilirubin testi
Üç farklı diazoreaction metodları:
-Jendrassik Grof (10) : Hitachi 917
-Molley-Evelyn (11)=Integra 400
-Wahlefeld (12)= Modular
Reaktifler Roche Diagnostics Society. Farklı metodlar ilk olarak CFAS kullanılarak kalibre
edilmiştir.
Dahili ve Dış kalite kontrol: Roche Diagnostics Analizor sonuçları karşılaşılmış ve yüksek
uyumluluk bulunmuştur.sonuçlar micromoles per liter (umol/L) olarak raporlanmıştır.
Uygulama Kriterleri-2
TESTLER VE ENZİMATİK AKTİVİTE ÖLÇÜMLERİNİN DETAYLARI tablo I de özetlenmiştir. (1)(2).
Bu tablodaki cihazlar listesi geçici bir listedir. Farklı analizörleri ve diğer kaynaklı
reaktifleride dahil edecek bazı çalışmalar sürdürülmektedir.
Analyzer
Alpha-2 macroglobulin BN2
(<1.50 g/l )
BN-Prospec
Haptoglobin
BN2
(<2.00 g/l)
BN-Prospec
Reagents
Material or reference Analytical
method
method
Precision (CV) Units
Intra- interseries
Dade-Behrin
„
Dade-Behring
„
CRM 470
„
CRM 470
„
Nephelemetry
„
Nephelemetry
<3%
<2%
<3%
<3%
<3%
<2%
<3%
<3%
g/l
g/l
g/l
g/l
Integra 400
Roche Diagnostics CRM 470
Turbidimetry
<2%
<2%
g/l
Apolipoprotein A1
BN2
BN-Prospec
Dade-Behring
,,
Nephelemetry
<3%
<2%
<6%
<3%
g/l
g/l
(<1.50 g/l)
Integra 400
Roche Diagnostics WHO-IFCC SP1-01
Turbidimetry
<2%
<3%
g/l
Hitachi 917
Roche Diagnostics Szasz method
WHO-IFCC SP1-01
,,
Gamma-GT
(<42 u/l)
Enzymatic
<2%
<2%
U/l
<2%
U/l
Modular
,,
standardized against the Initial calibration
original Szasz method(8) with C.F.A.S
<2%
Integra 400
,,
<2%
<2%
U/l
<3%
<3%
µmol/l
<3%
<3%
µmol/l
<3%
<3%
µmol/l
<5%
U/l
<5%
U/l
<5%
U/l
Total bilirubin
Diazoreactions
(<17 µmol/l)
Hitachi 917
,,
Modular
Integra 400
Jendrassik
Grof(10
Roche Diagnostics
,,
SRM 909b,
with reference method of Malloy
Evelyn (11)
Doumas (13)
Wahlefeld (12)
Initial calibration
with C.F.A.S
ALT
(<20 U/l)
Enzymatic
Hitachi 917
Roche Diagnostics
Modular
,,
<5%
IFCC with phosphate Initial calibration
with C.F.A.S
pyridoxal (9)
<5%
Integra 400
,,
<5%
CRM: Certified Reference Material for 14 serum proteins, Community Bureau of Reference (BCR),
:International Federation of Clinical Chemistry (IFCC), College of American Pathologists-(CAP).
SRM: Standard Reference Material
CFAS (Roche Diagnostics): Calibrator For Automated Systems
WHO-IFCC SP1-01 : World Health Organization and International Reference Material
Uygulama Kriterleri-2
Table I : Analytical methods used for the Fibrotest and Actitest assays
Références
Imbert- Bismut F, Ratziu V, Pieroni L, Charlotte F, Benhamou Y, Poynard T. Biochemical markers of liver fibrosis
in patients with hepatitis C virus infection : a prospective study. Lancet, 2001, 357, 9262, 1069-1075.
Poynard T, Imbert- Bismut F, Ratziu V, Chevret S, Jardel C, Moussali J. Biochemical markers of liver fibrosis in
patients infected by hepatitis C virus : longitudinal validation in a randomized trial. J. Viral. Hepat, 2002, 9, 1-6.
Bienvenu J, Doche C, Later R, Manceaux J.C, Pontet E, Pressac M, Vassault A, Dumont G. Améliorations
apportées par le matériau de référence CRM 470 dans la standardisation du dosage des protéines sériques. Ann.
Bio. Clin, 1997, 55, 37-40.
Dati F, Schumann G, Thomas L, Aguzzi F, Baudner S, Bienvenu J, Blaabjerg O, Blirup- Jensen S, Carlstrom A,
Petersen PH, Johnson AM, Milford- Ward A, Ritchie RF, Svendsen PJ, Whicher J. Consensus of a group of
professional societies and diagnostic companies for interim reference ranges for 14 proteins in serum based on the
standardization against the IFCC/BCR/CAP Reference Material (CRM 470). International Federation of Clinical
Chemistry. Community Bureau of Reference of the commission of the European Communities . College of
American Pathologists. Eur. J. Clin .Chem .Clin .Biochem, 1996, 34, (6), 517-20.
Albers J.J, Marcovina S.M, and H. KennedyInternational Federation of Clinical Chemistry Standardization Project
for Measurement of Apolipoproteins A1 and B. II Evaluation and Selection of Candidate Reference Materials. Clin.
Chem., 1992, 38, 5, 658-662.
Myara A, Ferard G, Guéchot J, Imbert- Bismut F, Lasnier E, Piton A, Voitot H, Dhumeaux D. Calibration to
achieve standardization in enzymology, example of ALT. Clin. Chem. Lab. Med. ,2001,39, Special Supplement pp
S1-S448.
Groupe de Travail SFBC ( Lessinger J.M, Doffoel S, Ferard G, Grafmeyer D, Schiele F, Vassault A, Vialle A) Assurance de Qualité en Enzymologie Clinique- et Hépatites(Myara A, Guéchot J, Imbert- Bismut F, Lasnier E, Piton A, Voitot H).
Le calibrage en enzymologie clinique : principe, conditions d’application et résultats. Ann Biol Clin, 2002, 60, 2816.
Szasz G, Persijn JP, van der Slik W. A new method for the determination o γ-Glutamyl-transférase. J Clin Chem
Clin Biochem 1976 ; 14 : 421-427.
Bergmeyer HU, Horder M, Rej R. Approved recommendation (1985) on IFCC methods for the measurement of
catalytic concentration of enzyms. Part 3. IFCC method for alanineaminotransférase. J. Clin. Chem. Biochem, 1986,
24, 481-489.
Jendrassik Grof. Vereinfachte Photometrische Methoden zur Bestimmung des Blutbilirubins. Biochem Z, 1938, 297,
8189.
Malloy HT, Evelyn KA. The determination of bilirubin with photoelectric colorimeter J. Biol. Chem, 1937, 19,
984-993.
Wahlefeld AW, Herz G, Bernt E. Modification of the Malloy- Evelyn method for a simple, reliable determination of
total bilirubin in serum. Scand. J . Clin. Lab. Invest, 1972, 29, supp 26,. Abstract 11-12.
13- Doumas BT, Perry BN, Sasse EA et al. Standardization in bilirubin assays : Evaluation of selected methods and
stability of bilirubin solutions. Clin. Chem, 1973, 19, 984-993
Uygulama Kriterleri-2