ADPtest

06673686001V2
ADPtest
REF 06675786
REF 06675794
190
190
1 x → 1.0 mL
3 x → 1.0 mL
Sulandırılmış reaktifin stabilitesi:
2-8 ℃’de
-20 ℃’de
18-25 ℃’de bir kere çözdürdükten sonra
Türkçe
Kullanım amacı
Trombosit adenozin difosfat (ADP) reseptörlerinin uyarılmasının
ardından trombosit fonksiyonunun kantitatif in vitro tayini için test
çalışmasıdır. Reaktif Multiplate analizöründe tam kan numuneleri ile
trombosit agregasyon testinde kullanım içindir.
Özet
Adenozin difosfat (ADP) trombositlerin yoğun granüllerinde saklanan bir
nükleotiddir. Aktivasyondan sonra, trombositler şekil değişikliği geçirir ve
alfa ve yoğun granüllerinin içindekileri serbest bırakır. Yoğun granüllerden
iç ADP stoklarının serbest kalması trombosit membranları üzerindeki
purinerjik reseptörlere, P2Y1 ve P2Y12’ye bağlanarak dolaşımdaki lokal
serbest trombositleri aktive etmesine ek olarak yapışmış trombositlerin
aktive edilmesini de sağlar. Trombositler aktive edildiğinde, trombosit
membranı üzerindeki glikoprotein αIIbβ3 (GPIIb/IIIa) reseptörlerinin
tek tek bileşenleri konformasyonlarını fiziksel olarak değiştirerek
yüksek afiniteli fibrinojen bağlanma yerini GPIIb/IIIa oluşturur. Hem
dolaşımdaki hem de alfa granüllerinden salgılanan fibrinojen sonradan
GPIIb/IIIa reseptörlerine bağlanarak trombosit-trombosit köprülerini
oluşturup trombosit agregasyonuna yol açar.1
ADP’nin neden olduğu trombosit agregasyonu Glanzmann trombasteni
veya tienopiridin alan kişilerde azalabilir veya olmayabilir.2,3,4
Trombosit agregasyonu sonuçta GPIIb/IIIa – fibrinojen köprülerinin
oluşmasına bağlı olduğu için, anti-GPIIb/IIIa ilaçları ADP’nin neden olduğu
agregasyon yanıtını azaltabilir veya ortadan kaldırabilir.5
Test prensibi
ADPtest reaktifi, trombositlerin ADP reseptörleri aracılığıyla trombosit
aktivasyonunu tetikleyen ADP içerir. Multiplate Test Cell’de aktive edilmiş
trombositler sensör tellerine bağlanıp bunların üzerinde agregasyon
gösterir. Bu, sensör telleri arasında direncin artmasına yol açar ve bu
direnç sürekli olarak kaydedilip keyfi birimlerde (AU*dak veya U; çevrim:
1 U = 10 AU*dak) eğri altında alan (AUC) ile ifade edilir.4
ADPtest testi P2Y12 reseptörünün inhibisyonunun4,6,7 yanı sıra GpIIb/IIIa
reseptörünün inhibisyonu veya olmamasına duyarlıdır.2,5,8
Reaktifler - çalışma solüsyonu
REF 06675786190
R1: 1.0 mL’lik 1 flakon
Adenozin difosfat içeren liyofilize reaktif: 0.2 mM. Alikotlama
için 5 mikro test tüpü.
REF 06675794190
R1: Her biri 1.0 mL’lik 3 flakon
Adenozin difosfat içeren liyofilize reaktif: 0.2 mM.
Önlemler ve uyarılar
In vitro tanıda kullanım için.
Tüm laboratuvar reaktiflerinin kullanılmasında gerekli olan
genel önlemleri uygulayın.
Tüm atık malzemelerin atılması yerel yönetmeliklere göre olmalıdır.
Profesyonel kullanım için talep edildiğinde güvenlik veri formu mevcuttur.
Reaktif kullanımı
Bir R1 flakonunun içindekileri 1.0 mL distile veya deiyonize su ekleyerek
dikkatle sulandırın. R1’i yavaşça karıştırın ve flakonu kapalı olarak
18-25 ℃’de 10 dakika bekletin. Kullanmadan önce, homojen bir
solüsyon elde etmek için flakonu dikkatle döndürün. Köpük oluşmasını
engelleyin. Solüsyon berrak ve renksiz olmalıdır.
Not: Flakonlar vakum yerine soy gaz ile doldurulur. Sulandırdıktan sonra
maksimum stabilite elde etmek için, günlük kullanım için reaktiften ≥ 100 µL’lik
kısımları mikro test tüplerine pipetleyin ve uygun şekilde saklayın.
7 gün
4 hafta
24 saat
Reaktifi ışık, hava veya yüksek sıcaklıklara maruz kalmaktan koruyun.
Örnek toplama ve hazırlama
Sadece aşağıda listelenen örnek test edilmiştir ve kabul edilebilir
olarak bulunmuştur: tam kan.
Numune toplamak için standart numune alma tüplerini kullanın ve
gerekli üreticinin kullanım talimatlarına uyun. Kan toplama uzun
süreli venöz stazdan kaçınılacak şekilde ve kan alımı sırasında uzun
çaplı bir iğne kullanılarak dikkatle gerçekleştirilmelidir. Kan toplama
tüpünde köpük oluşmasından kaçının.
İçeriğin tamamen karıştığından emin olmak için toplama
tüpünü yavaşça alt üst edin.9
Numuneleri dondurmayın veya buzdolabına koymayın. Kanda
analizden önce ön ısıtma yapmayın.10,11
Kan numunesi toplama için kullanılan antikoagülan belirgin şekilde
test sonuçlarını etkiler.10 Piyasada bulunan hirudin kan alma
tüplerinin kullanılması önerilir.9
Alternatif olarak standart lityum-heparin tüpleri veya sitratlı tüpler
(% 3.2 sitrat) kullanılabilir.6,12 Sitratlı kan toplama tüplerinin her
zaman aşırı sitrat seviyelerinden kaçınmak için belirtilen dolum
hacmine kadar doldurulduğundan emin olun.
Heparin kan analiz edildiğinde, tienopiridinlerin izlenmesi için ADPtest HS
(ADPtest + Prostaglandin E1 Reaktifi) testinin kullanılması önerilir.
Heparin, ADPtest test çalışmasında tienopiridinler ile trombosit
inhibisyonunu maskeleyebilecek belirli trombosit-aktive etme özelliklerine
sahiptir.7 Tienopiridinlerin izlenmesine yönelik en geniş deneyim şu
an için hirudin kan için mevcuttur.13,14,15
Kan toplama sistemi her merkezde standardize edilmelidir. Sadece aynı
numune antikoagülanı (heparin, sitrat veya hirudin gibi) kullanıldığında tek bir
numunenin sonuçlarının referans aralıklarla karşılaştırılması mümkündür.
Numuneler kan toplandıktan sonra 0.5-3 saat içerisinde analiz edilmelidir.10
Kit içinde bulunan malzemeler
• Reaktif için “Reaktifler - çalışma solüsyonu” bölümüne bakın.
Gerekli malzemeler (kit içinde bulunmayan)
• REF 06675689190, Aliquot Vials for ADPtest
• REF 06675751001, Hirudin Blood Tubes, 50 tüp
• REF 06675760001, Hirudin Blood Tubes, 10 tüp
• REF 06675972190, NaCl/CaCl2 Solution
• REF 06675930190, GpIIb/IIIa Antagonist Reagent, 1 x 0.5 mL
• REF 06675948190, GpIIb/IIIa Antagonist Reagent, 3 x 0.5 mL
• REF 06675891190, Prostaglandin E1 Reagent, 1 x 1.0 mL
• REF 06675905190, Prostaglandin E1 Reagent, 3 x 1.0 mL
• REF 06675590001, Test Cells, 6 x 10 adet
• % 0.9 salin solüsyonu
• Multiplate analizörü. Gerekli ilave malzemeler için analizörün kullanıcı
kılavuzuna ve kısa talimat kılavuzuna bakın.
• Distile veya deiyonize su
• Genel laboratuvar cihazları
Test Çalışması
Test performansının en iyi durumda olması için, bu belge içerisinde
ilgili analizör için verilen talimatları takip edin. Analizöre özgü test
talimatları için uygun kullanıcı kılavuzuna bakın. Roche tarafından
onaylanmamış uygulamaların performansı konusunda garanti verilmemiş
olup, bunlar kullanıcı tarafından tanımlanmalıdır.
R1 ve numuneleri belirlenmiş pozisyonlara yerleştirin.
Saklama ve stabilite
2-8 ℃’de saklayın. Liyofilize reaktifler belirtilen son kullanma tarihine kadar
stabildir. Sulandırılan reaktif mikro test tüplerinde kısımlara ayrılmazsa,
orijinal flakon dik bir pozisyonda saklanmalıdır.
2012-10, V 2 Türkçe
1/3
Multiplate analizörleri
ADPtest
Hirudinize veya heparinize kan için test prosedürü:
Salin solüsyonu, % 0.9 (önceden 37 °C’ye ısıtılmış)
Numune (18-25 °C)
İnkübasyon
R1
Ölçüm süresi
300 µL
300 µL
180 saniye
20 µL
6 dakika
Tekrarlanabilirlik
Tekrarlanabilirlik, iki cihazda tüm kanallarda (ör. toplamda 10 ölçüm) hirudinize
tam kan numunesinin ölçülmesiyle belirlenmiştir. Ortalama, standart sapma
ve varyasyon katsayısı hesaplanmıştır. Test çalışması her numunede
aynı cihazlar ve reaktif flakonları kullanılarak toplam üç kan numunesinde
gerçekleştirilmiştir. Aşağıdaki sonuçlar elde edilmiştir:
Numune
Numune 1
Numune 2
Numune 3
Sitratlı kan için test prosedürü:
NaCl/CaCl2 solüsyonu (önceden 37 °C’ye ısıtılmış)
Numune (18-25 °C)
İnkübasyon
R1
Ölçüm süresi
300 µL
300 µL
180 saniye
20 µL
6 dakika
Nihai konsantrasyon: 6.5 µM ADP.
Sıcaklık koşulları ve inkübasyon sürelerine tam olarak uyulmalıdır. Elektronik
pipet kullanırken Multiplate analizöründe gösterilen yazılım talimatlarına uyun.
Kalite kontrol
Trombosit agregasyon çalışmalarının sonuçları aynı anda test edilen normal
numunenin agregasyon profillerinin sonuçlarına göre yorumlanmalıdır.
GpIIb/IIIa Antagonist Reaktifi veya Protaglandin E1 Reaktifinin eklenmesiyle
anormal (inhibe edilmiş) agregasyon elde edilebilir.4
Sınırlamalar - interferanslar
Çeşitli ilaçlar ve bitkisel tedavilerden sonra bozulmuş trombosit fonksiyonu
bildirilmiştir.16 Trombositopeni olan hastalarda agregasyon anormal olabilir.17
ADPtest, siklooksijenaz inhibisyonu ve ilişkili ilaçlara karşı duyarlılık
hiç göstermemekte veya çok az göstermektedir.18
Önceden ısıtılmamış salin solüsyonunun kullanılması veya daha
kısa inkübasyon sürelerinin uygulanması yanlış sonuçlara neden
olabilir. Salin solüsyonu metil ester gibi katkı maddeleri içermemelidir.
Bu yanlış pozitif sonuçlara neden olabilir.
Numunede GpIIb/IIIa antagonistlerinin olması zayıf agregasyona yol açabilir.4
Klopidogrel veya diğer tienopiridin ilaç tedavileri ve numunede direkt ADP
reseptör antagonistlerinin olması daha zayıf agregasyon yanıtlara yol açabilir.18
Tanı amacıyla, sonuçlar her zaman hastanın tıbbi öyküsü, klinik muayenesi
ve diğer bulgularla birlikte değerlendirilmelidir.
Beklenen değerler
Hirudin Kan tüpleri kullanılarak 53 sağlıklı donör ile yapılan bir
çalışmada normal değerler belirlenmiştir.
Sonuç (5.-95. persentil):
AUC [U]
ADPtest
57-113
Not: Referans değerlerin belirlenmesi için normal donör test çalışmasından
önceki 10 gün içerisinde asetilsalisilik asit, klopidogrel veya klopidogrel
ya da asetilsalisilik asit içeren bileşikler almamalıdır.19
Her laboratuvar beklenen değerlerin kendi hasta popülasyonuna taşınabilirliğini
incelemeli ve gerekiyorsa kendine ait referans aralıkları belirlemelidir.
Spesifik performans verileri
Multiplate analizöründen alınan örnek performans verileri aşağıda verilmektedir.
Ayrı ayrı laboratuvarlardan elde edilen sonuçlar farklılık gösterebilir.
Multiplate analizörleri
Ortalama AUC [U]
96
100
90
SD AUC [U]
4
7
3
CV
%4
%7
%3
Kaynaklar
1. Ruggeri ZM. Platelets in atherothrombosis. Nat Med 2002; 8:1227-1234.
2. Halimeh S, Angelis G, Sander A, et al. Multiplate Whole Blood Impedance
Point of Care Aggregometry: Preliminary Reference Values in Healthy
Infants, Children, and Adolescents. Klin Padiatr 2010; 222: 158-163.
3. Bernlochner I, Morath T, Brown PB, et al. A prospective randomized
trial comparing the recovery of platelet function after loading dose
administration of prasugrel or clopidogrel. Platelets 2012 Feb 28.
4. Sibbing D, Braun S, Jawansky S, et al. Assessment of ADP-induced
platelet aggregation with light transmission aggregometry and
multiple electrode platelet aggregometry before and after clopidogrel
treatment. Thromb Haemost 2008; 99: 121-126.
5. Desch S, Siegemund A, Scholz U, et al. Platelet inhibition and GP
IIb/IIIa receptor occupancy by intracoronary versus intravenous
bolus administration of abciximab in patients with ST-elevation
myocardial infarction. Clin Res Cardiol 2011 Oct 21.
6. Velik-Salchner C, Maier S, Innerhofer P, et al. Point-of-care whole
blood impedance aggregometry versus classical light transmission
aggregometry for detecting acetylsalicylic acid and clopidogrel: the results
of a pilot study. Anesth Analg 2008 Dec;107(6):1798-806.
7. Calatzis A, Rahe-Meyer N, Theisen F, et al. Detection of acetylsalicylic
acid and clopidogrel using multiple electrode aggregometry. European
Journal of Anaesthesiology, V24, June 2007, p 67.
8. Awidi A, Maqablah A, Dweik M, et al. Comparison of platelet aggregation
using light transmission and multiple electrode aggregometry in
Glanzmann thrombasthenia. Platelets 2009 Aug; 20(5):297-301.
9. CLSI. Platelet Function Testing by Aggregometry; Approved Guideline.
CLSI document H58-A. Clinical and Laboratory Standards Institute; 2008.
10. Kaiser AF, Neubauer H, Franken CC, et al. Which is the best anticoagulant
for whole blood aggregometry platelet function testing? Comparison of six
anticoagulants and diverse storage conditions. Platelets 2011 Oct 14.
11. Behr T, Behr W, von Scheidt W. Monitoring of clopidogrel treatment by
multiplate electrode platelet aggregometry. J Lab Med 2010, 34(2), 99-107.
12. Djukanovic N, Todorovic Z, Obradovic S, et al. Abrupt Cessation of
One-Year Clopidogrel Treatment Is Not Associated With Thrombotic
Events. J Pharmacol Sci 2011;117(1):12-8.
13. Sibbing D, Braun S, Morath T, et al. Platelet reactivity after clopidogrel
treatment assessed with point-of-care analysis and early drug-eluting
stent thrombosis, J Am Coll Cardiol 2009 Mar 10;53(10):849-56.
14. Siller-Matula JM, Christ G, Lang IM, et al. Multiple electrode
aggregometry predicts stent thrombosis better than the
vasodilator-stimulated phosphoprotein phosphorylation assay. J
Thromb Haemost 2010 Feb;8(2):351-9.
15. Sibbing D, Steinhubl SR, Schulz S, et al. Platelet aggregation
and its association with stent thrombosis and bleeding in
clopidogrel-treated patients initial evidence of a therapeutic window.
J Am Coll Cardiol 2010 Jul 20;56(4):317-8.
16. CLSI. Platelet Function Testing by Aggregometry; Approved
Guideline. CLSI document H58-A. Clinical and Laboratory
Standards Institute; 2008, p.31.
17. Hanke AA, Roberg K, Monaca E, et al. Impact of platelet count
on results obtained from multiple electrode platelet aggregometry
(Multiplate). Eur J Med Res 2010 May 18;15(5):214-9.
18. Penz SM, Bernlochner I, Tóth O, et al. Selective and rapid monitoring of
dual platelet inhibition by acetylsalicylic acid and P2Y12 antagonists by
using multiple electrode aggregometry. Thromb J 2010 May 13;8:9.
2/3
2012-10, V 2 Türkçe
06673686001V2
ADPtest
19. CLSI. Defining, Establishing, and Verifying Reference Intervals in the
Clinical Laboratory; Approved Guideline-Third Edition. CLSI document
C28-A3. Clinical and Laboratory Standards Institute; 2008.
Daha fazla bilgi için, lütfen ilgili analizörün kullanıcı kılavuzu ve kısa talimat
kılavuzuna, ilgili aplikasyon sayfaları, ürün bilgisi ve gerekli tüm bileşenlerin
Yöntem Sayfalarına bakın.
Bu Yöntem Sayfasında, ondalık sayının tam sayı ile kesirli kısmı
arasındaki sınırı belirleyen ondalık işaret olarak nokta kullanılmaktadır.
Binlik işaret ise kullanılmamaktadır.
Önemli eklemeler veya değişiklikler sayfa kenarındaki değişiklik çizgileri ile belirtilmektedir.
© 2012, Roche Diagnostics
Roche Diagnostics GmbH, Sandhofer Strasse 116, D-68305 Mannheim
www.roche.com
2012-10, V 2 Türkçe
3/3
Multiplate analizörleri