path-checktm hygıene pathogen patojen tespit sistemleri

PATH-CHECKTM HYGIENE PATHOGEN
PATOJEN TESPİT SİSTEMLERİ
Kontak petri ve swabların kullanıldığı yüzeyden örnek alma teknikleri için metodların ve test
prosedürünün temel unsurları ISO 18593:2004(E)-Gıda ve Yem mikrobiyolojisi- standardında
belirtilmiştir.
Bu standardın dikkate alınması gereken temel unsurları şunlardır:
1. Tüm örnek yüzeyleri için nemli swab kullanılmalı
2. Swabı nemlediren solüsyon herhangi bir deterjanı veya hijyen ajanını nötralize etmeli
3. Swab nemlendirici solüsyon örnek içeriğini; örneğin bakteriyal yükü korumalı ve toplanan
örneğin değerlendirilme aşamasına kadar sabit olmasını sağlamalı.
4. Örnek alınan alan 100 cm2’den büyük olmalı
5. Spesifik patojenlerin analizi için swablar uygun zenginleştirici ortama transfer edilir.
6. Zenginleştirme sonrasında hedef organizmanın gözlenmesi için örnek uygun katı besiyerine
transfer edilir.
7. Hedef mikroorganizmanın var- yok testi yapılır.
8. Kontak petri metodu (Dipslide, RODAC petriler ve 3M PetrifilmTM ) patojenik
mikroorganizmaların spesifik tespiti için kullanılmamalıdır.
PROSEDÜR
ADIM 1:
Önceden nemli Path-Check Hijyen swabın kapağına dikkatlice açınız.
ADIM 2:
Standart örnek yüzeyinden (10 X 10 cm) swap döndürülerek yüzeyden örnekler toplayınız. Örnek
toplama yüzeyi düzensiz ise standart örnekleme prosedürü oluşturulup sürekli aynı prosedür
uygulanmalı.
ADIM 3:
Test yüzeyinden swab örneği alındıktan sonra Path-Check Hygiene Broth tüpünün kapağı aseptik
koşullarda açılarak swab tüpün içerisine dikkatlice yerleştiriniz.
Swap hemen Path-Check Hygiene Broth içerisine yerleştirilmez ise taşıyıcı tüpe aktarılarak serin bir
yerde tutunuz.
Path-Check Hygiene Broth tüpünü veya taşıyıcı tüpünü etiketleyiniz.
Notlar:
1. Swab Path-Check Hygiene Broth tüpüne swab ucu tüpün kenarına gelecek şekilde 45°’lik açı ile
yerleştiriniz. Swab bacağını aşağıya doğru bastırınız. Swab bacağı kırılma noktasından ( swab ucundan
45mm ) kırılacaktır.
2. Eğer swap hemen Path-Check Hygiene Broth içerisine yerleştirilmez ise, swab taşıyıcı tüpe
aktarılarak serin bir yerde tutulmalı. Swab maximum sıcaklıkta 20 °C’de ancak 24 saat bekletilebilir.
ADIM 4:
İnoküle edilmiş örnek tüplerini uygun bir rack üzerine yerleştiriniz ve Koliform ve Salmonella için
35-37 °C’de 18-24 saat, Listeria için 28-30 °C’de 24-48 saat inkübe ediniz.
Not: Listeria örneklerinin inkübasyonu 35-37 °C’de gerçekleştirilirse yanlış pozitif riski
artabilmektedir.
ADIM 5:
Renk değişimleri gözleyip sonuçları kaydediniz. Pozitif sonuçlar 18 saatlik inkübasyon sonrasında
gözlenebilir, fakat negatif sonuç için inkübasyon sürelerinin tamamlanmasını bekleyiniz (Koliform ve
Salmonella için 24 saat, Listeria için 48 saat).
ADIM 6:
Yorum
Sistem
Pozitif
Koliform
Sarı
Salmonella
Siyah
Listeria
Siyah
Tablo 1: Path-Check Hygiene Broth örneklerinin sonuç yorumu
Negatif
Mor
Sarı/Mor
Saman rengi
ADIM 7:
OPSİYONEL DOĞRULAMA PROSEDÜRÜ
Olası pozitif testler organizmanın varlığını doğrulamak için uygun seçici agar petriye büyüme
medyumundan bir damla ekim yapılır.
Aşağıdaki agar medyumların kullanımı BAM ve USDA/FSIS gibi standart test metodlarına uygunluk
sağlar.
Sistem
Koliform/ E.coli
Medyum
mENDO
VRBA
Salmonella
XLD
Bismuth Sulfide
Listeria
Oxford
Palcam
ALOA
Tablo 2: Pozitif olarak tespit edilen örneklerin doğrulaması için uygun medyumlar
Petri örnekleri 35-37 °C’de 24-48 saat inkübe edildikten sonra petride hedef koloni gözlemi yapılır.
Şüpheli koloniler için ileri identifikasyon testleri ( mikroskobik testler ve Microgen GNA ID (MID-64),
GNB ID (MID-65) ve Listeria ID (MID-67) gibi biyokimyasal testler ) uygulanmalıdır.