PLATELIA™ ASPERGILLUS Ag 62794 96 TEST - Bio-Rad

Transkript

PLATELIA™ ASPERGILLUS Ag
96 TEST
62794
PLATELIA™ ASPERGILLUS Ag, SERUM VE BRONKOALVEOLER LAVAJ (BAL) SIVISINDA
ASPERGILLUS GALACTOMANNAN ANTİJEN BULUNMASI İÇİN İMMUNOENZİMATİK SANDVİÇ
MİKRO PLAKA TESTTİR
İÇİNDEKİLER
1.
Kullanım Amacı
2.
Kullanım için Belirtiler
3.
Özet ve Açıklama
4.
Çalışma Prensibi
5.
Reaktifler
6.
Kullanıcılar için Uyarılar
7.
Kullanıcılar için Önlemler
8.
Reaktif Hazırlama ve Depolama
9.
Numune Toplama
10. Prosedür
11. Kalite Kontrol (Validite Kriteri)
12. Sonuçların Yorumlanması
13. Prosedürün Limitleri
14. Beklenen Değerler
15. Performans Karakterleri
16. Kaynakça
1
1- KULLANIM AMACI
Platelia™ Aspergillus Ag, yetişkin ve pediatrik serum örnekleri ve bronkoalveoler lavaj (BAL) sıvısı örnekleri içinde
aspergillus galaktomannan antijen bulunması için immunoenzimatik sandviç mikro plaka testtir
2- KULLANIM İÇİN BELİRTİLER
Platelia™ Aspergillus Ag, mikrobiyolojik kültür, biyopsi örneklerinin histolojik incelenmesi ve radyografik bulgu gibi diğer
teşhis prosedürleri ile bir arada kullanıldığında, İnvazif Aspergillosis teşhisinde yardımcı olarak kullanılabilir.
3- ÖZET VE AÇIKLAMA
Aspergillus enfeksiyonları genellikle ortamda bulunan Aspergillus sporlarının solunmasından sonra ortaya çıkar. Son 10
yılda artış gösteren invazif formları en ciddi enfeksiyonları oluşturur. Bunlar genellikle nötropenik hastalarda (anti kanser
tedavisinin ardından) ve bağışıklık bastırıcı tedavi gören hastalarda (organ nakilleri özellikle kemik iliği nakli) ve
kortikosteroid kullanan hastalarda görülür 10.
Aspergillus nadiren kan kültüründen izole olur. Teşhis sıklıkla spesifik olmayan tanı veya radyolojik bulgulara dayalıdır (klinik
semptomlar, CT tarama, göğüs röntgeni vs.)
Test, serum içinde çözülebilir galaktomannan antijen için test İnvazif Aspergillosis teşhisinde yardımcı serolojik metot olarak
kullanılmaktadır 9,12, 23, 54, 62
İlave olarak, solit organ nakli alıcıları için bronkoalveoler lavaj (BAL) içinde galaktomannan antijeninin belirlenmesi bu
popülasyonda İnvazif Aspergillosis teşhisinde avantaj sağladığı kanıtlanmıştır. 8,17, 8
4- PROSEDÜR’ÜN PRENSİBİ 45
Platelia™ Aspergillus Ag, insana serumu ve BAL sıvısı içinde galaktomannan algılayan tek aşamalı immunoenzimatik
sandviç mikro plaka testtir Test rat EBA-2 monokolonal antibadileri kullanır, bunlar Aspergillus galaktomannana yönlendirilir
ve böylelikle karakterize edilmelerini sağlar
Önceki çalışmalarda 25, 46. Monoklonal antibadileri, (1) mikroplaka çukurcuklarını kaplamak ve antijeni bağlamak ve
(2) hassaslaşan mikro plakaya yapışan antijeni algılamak için kullanılırdı (konjuge reaktif: peroksidaz bağlı monoklonal
antibadileri) Serum veya BAL sıvısı örnekleri EDTA mevcudiyetinde ısıl işleme tabi tutularak immun komplekslerin bağları
çözülür ve test ile interferans yaratması olası proteinleri çöktürülür 24. İşleme tabi tutulmuş örnekler ve konjuge monoklonal
antibadiler ile kaplanmış çukurcuklara eklenir ve inkübe edilir. Galaktomannan antijen varlığında, monoklonal antibadi galaktomannan – monoklonal antibadi / peroksidaz kompleksi oluşur.
Bağlanmamış materyallerin çıkartılması için şeritler yıkanır. Sonra, kromojen TMB solüsyonu eklenir, bu çukurcuklara
bağlanan kompleksler ile reaksiyona girerek mavi renk reaksiyonu oluşturur. Enzim reaksiyonu asit eklenerek durdurulur, bu
işlem mavi rengi sarıya dönüştürür. Örneklerin absorbansı (optik yoğunluk) ve kontrol 450 ve 620/630 nm dalga boyuna
ayarlı spektrometre ile belirlenir.
5- REAKTİFLER
Platelia™ Aspergillus Ag: ürün No. 62794 (96 Test)
Kiti 2-8°C’de saklayın. Kullanımdan önce tüm reaktifler oda sıcaklığına (18-25°C) getirilmelidir ve bu işlem en az 30 dakika
beklenmelidir. Tüm reaktifleri kullanımdan sonra hemen 2-8°C’ye geri alın. Kullanılmamış şeritleri/plakaları poşete geri koyun
ve ağzını kapatın. Kurutucuyu çıkartmayın. Seyreltmenin ardından, Çalışma Yıkama Çözeltisi 2-30°C’de 14 gün saklanabilir.
Konsantre Yıkama Solüsyonu (R2) ve Durdurma Solüsyonu (R10) dışında diğer tüm reaktifler açıldıktan sonra 8 hafta içinde
kullanılmalıdır. Konsantre Yıkama Solüsyonu (R2) ve Durdurma Solüsyonu (R10) açıldıktan sonra son kullanım tarihine
kadar stabildir. Reaktifler maksimum 9 partide toplam 96 test yapmak için yeterlidir.
1
2
Bileşen
İçindekiler
Mikro plaka:
- 96 çukurcuk (12 şerit her birinde 8 çukurcuk) antigalaktomannan
monoklonal antibadi kaplı
Şerit numarası ‘’85’’
Miktar
1 Plaka /
12 x 8 Çukurcuk
R1
Microwell Strip Plate
R2
Concentrated
Washing Solution
Konsantre Yıkama Solüsyonu (20X):
- Tris NaCl tampon (Ph 7,4)
- %2 Tween® 20
- Koruyucu: <%1.5 ProClin™ 300
1 x 70 mL
Negative Control
Serum
Negatif Kontrol Serumu:
- Negatif insan serumu
- Anti-HIV-1, anti-HIV-2, anti-HCV antibadiler ve HBs antijen için
Negative
-Koruyucu: <%1.5 ProClin™ 300
2 x 1,7 mL
R4
Cut-off Control
Serum
Sınır Kontrol Serumu:
- Galaktomannan içeren insan serumu
Negative
Koruyucu: <%1.5 ProClin™ 300
2 x 1,7 mL
R5
Positive Control
Serum
Pozitif Kontrol Serumu:
- Galaktomannan içeren insan serumu
Negative
Koruyucu: <%1.5 ProClin™ 300
2 x 1,7 mL
R6
Conjugate
R7
R3
Konjugat (kullanıma hazır):
- Anti-galaktomannan monoklonal antibadi / peroksidaz etiketli
- Koruyucu:< %1.5 ProClin™ 300
1 x 8 mL
Sample Treatment
Solution
Numune Hazırlama Çözeltisi (kullanıma hazır):
- EDTA asit çözeltisi
1 x 13 mL
R9
Chromogen:TMB
Solution
Kromojen TMB Çözeltisi (kullanıma hazır): ♦
3,3’,5,5’- Tetrametilbenzidin* (<%0,1)
H2O2 (<% 1,0)
1 x 28 mL
R10
Stopping
Solution
Plate sealers
Durdurma Çözeltisi (kullanıma hazır):
- 1 N sülfirik asit (H2SO4)
- Mikro plakalar için yapışkan bantlar
1 x 28 mL
1 x 8 yaprak
♦Not: TMB (3,3’,5,5’-tetrametilbezidin) peroksit için kanserojen ve
mutajenik olmayan kromojendir.
6- KULLANICILAR İÇİN UYARILAR
1.
2.
3.
4.
ın vitro teşhis içindir.
Sadece profesyonel kullanım içindir.
Bu test kitinin insan serumu ve BAL dışındaki örneklerle kullanımı tavsiye edilmez.
Pozitif Kontrol, Sınır Kontrolü ve Negatif Kontrol CE işaretli testler ile test edilerek HBsAg ve HIV-1, HIV-2 ve HCV
antibadileri ile reaktif olmadığı belirlenmiş insan serumundan üretilmiştir. Bununla birlikte, tüm reaktifler enfeksiyon
geçirme riskine sahip şekilde kullanılmalıdır. Tüm testler Kandaki Patojenler için OSHA Standardı, Bio güvenlik Seviye
2 veya diğer uygun bio güvenlik uygulamalarına uygun şekilde yapılmalıdır.
3
5. Laboratuar önlüğü, göz/yüz koruyucu ve tek kullanımlık eldivenler (sentetik, latex olmayan eldivenler tavsiye edilir)
kullanın ve kit reaktifleri ve hasta örnekleriyle İyi Laboratuar Uygulamalarına uygun şekilde ilgilenin. Testi yaptıktan
sonra ellerinizi iyice yıkayın.
6. Ağzınızla pipetlemeyin.
7. Örnek veya test reaktifi bulunan alanlarda sigara ve içecek içemeyin ya da yemek yemeyin.
8. Örnek veya çözeltileri dökmekten kaçının.
9. Asit içermeyen biyolojik serpintiler efektif dezenfektan ile güzelce temizlenmelidir.
Kullanabileceğiniz dezenfektanlar (bunlarla sınırlı değildir) %10 çamaşır suyu (%0.5 sodyum hipoklorit), %70 etanol
veya %0.5 Wescodyne Plus™. Döküntülerin temizlenmesinde kullanılan malzemelerin biyolojik tehlikeli atık işlemine
tabi tutulması gerekebilir.
DİKKAT: Çamaşır suyu içeren çözeltileri otoklava koymayın.
10. Asit içeren döküntüler uygun şekilde emdirilerek (silinerek) veya sodyum bikarbonat ile nötralize edilerek silinmeli ve
bölge yıkanıp kurulanmalıdır; eğer biyolojik olarak tehlikeli malzeme varsa, alanı kimyasal dezenfektanlardan biri ile silin.
11. Tüm örnekleri ve test için kullanılan malzemeleri enfeksiyon unsuru içeriyormuşçasına bertaraf edin. Laboratuar
kimyasalları ve biyolojik olarak tehlikeli atıklar yerel, bölgesel ve ulusal yönetmeliklere uygun şekilde atılmalıdır.
12. DİKKAT: Aşağıdakiler bazı kit bileşenlerinde bulunan potansiyel kimyasal tehlikelerin listesidir (bkz bölüm 5 REAKTFİLER):
DİKKAT: EU ve US düzenlemelerine göre bazı reaktifler %1,5’dan az ProClin™300 içerir.
R43*: Deri ile temasında hassasiyete neden olur.
S23-24-37-60*: Buharı solumayın, deri ile temasından kaçının. Uygun eldivenler giyinin. Bu malzeme ve
şişesi tehlikeli atık olarak atılmalıdır.
Xi - sürtmek
*Risk (R) ve Güvenlik (S) konuları tehlikeli atık hazırlama hakkında özel bilgiler içermektedir (2001/59/EC).
C-aşındırıcı
1.0 N Sülfürik Asit (H2SO4) Durdurma Çözeltisi US düzenlemelerine göre aşındırıcıdır, göz ve ciltte yanmaya
sebep olabilir; yutulması veya cilt ile teması tehlikeli olabilir; gözde ciddi hasara sebep olabilir, kalıcı görme
bozukluğu ya da körlüğe sebep olabilir.
Güçlü bazlardan ve azaltıcı etkin maddelerden uzak tutun.
Bu malzemenin atıkları tehlikeli asidik atık olarak kabul edilir, bununla birlikte eğer yerel, bölgesel veya ulusal
yönetmelikler izin veriyorsa, tehlikeli olmayan atık olması için pH 6-8 arasında nötrleştirilebilir, ancak bunun
eğitimli olmak ve gereken donanıma sahip olmak gereklidir.
13. Malzeme Güvenlik Bilgi Formu (MSDS) istek üzerine sağlanabilir veya www.bio-rad.com adresinden ulaşılabilir.
7- KULLANICILAR İÇİN ÖNLEMLER
1. BİLİNMEYEN ŞARTLARDA SAKLANAN DONDURULMUŞ SERUM VEYA BAL SIVISI ÖRNEKLERİ MANTAR
VE/VEYA BAKTERİ KONTAMİNASYONU SEBEİYLE YANLIŞ POZİTİF SONUÇ VEREBİLİR.
2. Belirtilmiş son kullanma tarihinden sonra kit veya kit reaktiflerini kullanmayın.
3. Konsantre Yıkama Çözeltisi (R2, 20x, yeşil renkli) ve Kromojen (R9, TMB, turkuaz renkli), Durdurma solüsyonu (R10, 1
N, kırmızı renkli) istisnaları dışında reaktifleri farklı lot numarasına sahip başka kitlerdeki reaktifler ile karıştırmayın.
NOT: Bio-Rad tarafından sağlanan yeşil renkli 20x olarak etiketlenen yıkama solüsyonunu (R2), mavi renkli 10x olarak
etiketlenen yıkama solüsyonu (R2) ile karıştırmayın
4. Tüm reaktifler kullanımdan en az 30 dakika önce oda sıcaklığına getirilmelidir.
5. Kullanmadan once her reaktifi iyice karıştırın.
6. Çalışmak için yıkama solüsyonu hazırlamadan once konsantre yıkama solüsyonunu iyice karıştırın, mikro biyolojik
kontaminasyona yol açmamaya dikkat edin.
7. Testleri Konjugat’ın enzimatik aktivitesini etkileyebilecek reaktif buharı (asit, alkali, aldehid) veya toz bulunan yerlerde
yapmayın.
8. Kontrol ve örneklerin manuel olarak pipetlenmesinde örnek bulaşmasını önlemek için her seferinde farklı pipet ucu
kullanın.
9. Çukurcukların yeterli miktarda yıkandığından emin olmak için, tavsiye edilen yıkama döngü sayısına uyun ve
çukurcukların tamamen dolduğundan ve tamamen boşaldığından emin olun. Yıkama sıkılabilir şişe ile manuel olarak
yapılmalıdır.
10. Mikro plakanın yıkama döngüsü ile reaktif ekleme arasında kurumasına izin vermeyin.
11. Konjugat ve kromojen TMB çözeltilerİ için aynı kabı kullanmayın.
12. Konjugat ve Kromojen TMB çözeltilerinin metal ya da metalik iyonlarla temas etmesine izin vermeyin.
13. Kromojen TMB Çözeltisi saklama veya inkübasyon sırasında güçlü ışığa maruz kalmamalıdır. Kromojen çözeltilerine
oksidasyona sebep olan etken maddelerle temas etmesine izin vermeyin.
14. Durdurma Çözeltisinin oksidasyona sebep olan etken maddelerle temas etmesine izin vermeyin. Durdurma Çözeltisinin
metal veya metalik iyonlarla temas etmesine izin vermeyin.
15. Temiz, tozsuz malzemeler (tüpler, uçlar, kaplat vs) kullanın, bu ortamdaki Aspergillus sporlarından kaynaklanabilecek
kontaminasyon olasılığını azaltır Galaktomannan ısı dengeli olduğundan, malzemenin sterilizasyonu kontaminasyona
sebep olan antijen yokluğunu garanti etmez. Pirojen içermeyen malzemeler en uygundur, ancak yeterli dikkat ile standart
malzemeler kullanılabilir.
4
16. Çözeltilerin (sera, BAL sıvısı ve serum İşlem Çözeltisi, Konjugat) veya açık kapların (plakalar, tüpler, pipetler) hava ile
temasını sınırlayın.
17. Kullanmadığınız kalan Konjugat’ı orijinal kaba geri dökmeyin.
18. Kromojen TMB çözeltisi renksiz olmalıdır. Mavi renk olması reaktifin kontamine olduğunu gösterir ve bu durumda
kullanılmamalıdır. Atın ve yeni reaktif hazırlayın.
8- REAKTİF HAZIRLAMA VE SAKLAMA
Mikro Çukurcuk Şerit Plaka (R1)
Bir pakette 12 tane strip bulunmamaktadır. Tam noktasından açmak için makas kullanınız. Paketi açın ve çerçeveyi çıkarın.
Kullanılmayan stripleri paketine koyunuz. Paketi dikkatlice kapatınız ve 2-8 ºC’de saklayınız.Plaka poşetini açt ıktan sonra,
mikro çukurcuk şeritleri +2-8°C sıcaklıkta, birlikte verilen kurutucu ile birlikte ağzı dikkatle kapatılmış orijinal torbasında
muhafaza edildiğinde 8 hafta boyunca stabil kalır.
Yıkama Solüsyonu (R2)
Çalışma için hazırlanan yıkama çözeltisini 1 ölçek Konsantre Yıkama Çözeltisini 19 ölçek steril deiyonize su veya saf su ile
karıştırarak hazırlayın. Çalışma için hazırlanan yıkama çözeltisi 2-30°C’de 14 gün saklanabilir. Çalışmayı tamamlamak için
yeterli miktarda Çalışma Yıkama Çözeltisi hazırlayın (bir şerit için 80 mL: 4 mL R2 + 76 mL saf su)
Konsantre Yıkama Çözeltisi açıldıktan sonra +2-30°C’de saklanabilir, kontaminasyon olmadığı takdirde etiketteki son
kullanma tarihine kadar stabildir.
Negatif Kontrol Serumu (R3), Eşik Kontrol Serumu (R4), Pozitif Kontrol Serumu (R5)
Kontroller, hasta örnekleri gibi numune hazırlama çözeltisi (R7) ile işlemi izlemek için ısıl işleme tabi tutulmalıdır. Açıldıktan
sonra kontaminasyondan sakınıldığında ve 2-8 ºC’de saklandığında 8 hafta stabildir.
Konjugat (R6), Numune Hazırlama Solüsyonu (R7), Kromojen: TM solüsyonu (R9)
Reaktifler kullanıma hazırdır.
Açıldıktan sonra kontaminasyondan sakınıldığında ve 2-8 ºC’de saklandığında 8 hafta stabildir.
Durdurma Çözeltisi (R10)
Reaktif kullanıma hazırdır.
Açıldıktan sonra +2-8°C’de saklanabilir, kontaminasyon olmadığı takdirde etiketteki son kullanma tarihine kadar stabildir.
9- ÖRNEK ALMA
Bu test serum veya BAL sıvısında çalışılır.
I.SERUM
Kan örnekleri standart laboratuar prosedürlerine göre alınmalıdır. Serum örnekleri mantar sporları ve/veya bakteri ile
kontamine olmamalıdır. Örnekler sızdırmaz tüplerde, hava ile temas etmeden taşınmalı ve saklanmalıdır. Açılmamış
örnekler 2-8°C’de testten önce 5 güne kadar saklanabilir. İlk açılıştan sonra örnekler 2-8°C’de teste kadar 48 saat
saklanabilir. Daha uzun saklamalar için serum – 70°C’de saklanmalıdır.
Serum örnekleri maksimum 4 dondurma / çözme döngüsüne tabi olabilir. Önceden dondurulmuş örnekler test öncesinde
çözüldükten sonra iyice karıştırılmalıdır.
Sonuçlar 20 mg/L of bilirubin içeren örneklerden, 2 g/L triolein (trigliserid) içeren lipedemik örneklerden veya 200 mg/dL
hemoglobin içeren hemolizli örneklerden etkilenmez. Aşırı albümin ile ilişkili interferans test edilmemiştir.
Serumu eksiltmeyin.
II. BAL SIVISI
BAL sıvısı standart laboratuar prosedürlerine göre alınmalıdır. BAL sıvısı örnekleri steril izotonik solüsyonunun içine
alınmalıdır ve bölüm 10’daki numune hazırlama işleminden önce santrifüj edilen (10.000 rpm, 10 dakika) numuneden elde
edilen süpernatant veya ham numune ile çalışılabilir.
BAL sıvısı örnekleri mantar sporları ve/veya bakteri ile kontamine olmamalıdır. Örnekler sızdırmaz tüplerde, hava ile temas
etmeden taşınmalı ve saklanmalıdır. Açılmamış örnekler 2-8°C’de testten önce 24 saat saklanabilir. Daha uzun saklamalar
için BAL numuneleri – 20°C’de 5 ay saklanabilir.
BAL sıvısı örnekleri maksimum 4 dondurma / çözme döngüsüne tabi olabilir. Önceden dondurulmuş örnekler test öncesinde
çözüldükten sonra iyice karıştırılmalıdır.
10-PROSEDÜR
Sağlanan malzemeler
Bkz REAKTİFLER bölümü.
5
Gerekli olan ama sağlanmamış malzemeler
1. Konsantre Yıkama Çözeltisinin seyreltilmesi için steril distile veya deiyonize su.
2. Emici kağıt.
3. Tek kullanımlık eldivenler.
4. Koruyucu gözlükler.
5. Çamaşır suyu ve sodyum bikarbonat.
6. Pipet veya çoklu pipet, ayarlanabilir veya sabit, 50 μL, 100 μL, 300 μL, ve 1000 μL ölçmek ve vermek için.
7. 1.5 mL polipropilen santrifüj tüpleri, hava geçirmez tıpalı, 120°C (ısı bloğu) veya 100°C (kaynar su banyosu) dayanıklı.
 Vidalı kapaklı tüpler
 1.5 mL Konik Tüpler, Bio-Rad Kat. #224-0100 veya dengi.
VEYA
 Geçme kapaklı tüpler: EZ Mikro Test Tüpler, 1.5 mL, Bio-Rad Kat. #223-9480 veya dengi.
 Mikro tüp kapak kilitleri (VWR Kat. # 6054001 veya dengi). Bu kilitler geçmeli kapaklı tüplerin sızdırmazlığını
sağlayarak tüplerin sıcaklık veya basınç değişikliklerinde açılmasını önler ve tüplerin ısı bloğundan ya da kaynar su
banyosundan kolayca alınmasını sağlar.
 um veya BAL sıvısını hazırlamak için ısı bloğu kullanılacak ise:
 Isı bloğu. Aşağıdaki ısı blokları tavsiye edilir:
a.
1 blok model: Grant Kat. # QBD1 (VWR Kat. # 460-0074)
b.
2 blok model: Grant Kat. # QBD2 (VWR Kat. # 460-0076)
c.
Blok ısı bloğu: Katalog No: . # 460-8517

Serum veya BAL sıvısını hazırlamak için su banyosu kullanılacak ise Yüzer mikro santrifüj rafı.

100 ºC’ye ulaşabilen su banyosu
8. Vorteks karıştırıcı.
9. Mikro plaka inkübatörü 37 ± 1°C.
10. Yarı otomatik veya otomatik mikro plaka yıkayıcı.
11. 450 nm ve 620/630 nm filtrelere sahip mikro plaka okuyucu.
Prosedüre İlişkin Yorumlar
Negatif, Pozitif ve Eşik kontrolleri test sonuçlarının validasyonu için her seferinde test edilmelidir.
Serum/ BAL sıvısının hazırlanması
Tüm kontrol serumları: negatif (R3), kesme (R4) ve pozitif (R5) serum/ BAL sıvısı örnekleri ile aynı anda işlenmelidir:
1. Her test serumu/BAL sıvısı ve kontrolden 300 μL pipet ile alınarak 1.5 mL polipropilen tüplere konur.
2. Her tüpe 100 μL Serum İşlem Çözeltisi (R7) ekleyin.
3. Tüpleri güçlü şekilde elde veya vorteks karıştırıcı ile karıştırın. Geçmeli kapaklı tüplerin ısıtma sırasında açılmaması için
kapaklarını sıkıca kapatın.
4. Isı bloğu opsiyonu:
Tüpleri ısı bloğunda 120°C’de 6 dakika ısıtın. Tüpler sadece belirlenmiş ısıya ulaşıldıktan sonra bloğa yerleştirilmelidir.(*)
VEYA
Su banyosu opsiyonu:
Eğer kaynayan su banyosu kullanılıyorsa: tüpleri 100°C’de 3 dakika ısıtın(*).Tüpler sadece belirlenmiş ısıya ulaşıldıktan
sonra su banyosuna yerleştirilmelidir.
5. Tüpleri ısı bloğundan veya kaynar su banyosundan dikkatle alın ve santrifüje yerleştirin. 10,000 x g ile dakika santrifüje
tabi tutun.
6. Galaktomannan antijen belirlemesi için üstte yüzen faz (supernatant) kullanılır.
7. Aşağıdaki prosedürü kullanarak süpernatant’ı test edin. Hazırlamanın ardından, süpernatant alınarak 2-8°C’de test
edilene kadar 48 saat saklanabilir. Eğer analiz sonucu tekrar test etmenin gerekli olduğunu gösterirse, test için başka bir
örnek ile işleme tabi tutulabilir.
(*) Verilen sıcaklık ve dönüş sürelerine kesinlikle uyulması ve tavsiye edilen malzemelerin kullanılması testin
başarısı için gereklidir. Cihaz üzerinde gösterilen sıcaklığı dikkate almayın, sıcaklığın spesifikasyonlara
uygunluğunu kalibre edilmiş bir termometre ile kontrol edin: ısı bloğu içinde sıcaklık 120°C kaynar su
banyosunda ise 100°C olmalıdır.
EIA Prosedürü
Önerilen protokole kesinlikle uyulmalıdır. İyi
Laboratuar Uygulamalarına uyun.
1.
Reaktifleri kullanımdan en az 30 dakika önce oda sıcaklığına (18-25°C) getirin.
2.
Çalışma için yıkama çözeltisi hazırlayın.
3.
Test serumu/BAL sıvısı ve kontrollerin mikro plakada tanımlanması için bir tablo hazırlayın. Negatif Kontrol Serumu
(R3) için bir çukurcuk, Eşik Kontrol Serumu için (R4) iki çukurcuk ve Pozitif Kontrol Serumu için (R5) bir çukurcuk
kullanın.
6
A
B
C
D
E
F
G
H
1
R5
R4
R4
R3
S1
S2
S3
S4
2
S5
S6
S7
S8
S9
S10
S11
S12
3
S13
4
5
6
7
8
9
10
11
12
4. Plaka tutucuyu ve mikro çukurcuk şeritlerini (R1) plaka poşetinden çıkartın. Kullanılmayacak şeritleri kurutucu ile birlikte
poşete koyun ağzını sıkıca kapatın.
5. Konjugat şişesinin (R6) içindekileri kullanmadan önce çalkalayarak karıştırın. Her çukurcuğa 50 μL Konjugat (R6)
ekleyin. Sonra her çukurcuğa 50 μL işlem görmüş serum/BAL süpernatantı yukarıda belirtilen şekilde ekleyin. Serum
/BAL sıvısı örnekleri çukurcuklara konjugattan önce eklenmemelidir.
6. Plakayı plaka izolatörü veya buharlaşmayı önleyecek başka bir yol ile kapatın, tüm yüzey kapalı ve su geçirmez
olmalıdır.
7. Mikro plakayı kuru inkübatör içinde 37°C’de (± 1°C) 90 ± 5 dakika inkübe edin.
8. Plaka izolatörünü çıkartın. Çukurcukların içindekileri atık kabına aspire edin (içinde çamaşır suyu olmalıdır). Plakayı
minimum 370 μL Çalışma Yıkama Çözeltisi kullanarak 5 kez yıkayın. Son yıkamanın ardından mikro plakayı ters
çevirerek emici kağıda hafifçe vurarak kalan sıvıdan kurtulun.
9. Her çukurcuğa hızla 200 μL Kromojen TMB (R9) Reaksiyon Çözeltisi (R8 + R9) ekleyin ve parlak ışığa maruz
kalmasından kaçının.
10. Mikroplakayı oda sıcaklığında (18 ila 25°C) karanlık ortamda 30 ± 5 dakika inkübe edin. İnkübasyon sırasında
yapışkan bant kullanmayın.
11. Her çukurcuğa 100 μL Durdurma Çözeltisi (R10) ekleyin, Kromojen TMB solüsyonu ile aynı sırada koyun. İyice karıştırın.
12. Her plakanın altını iyice silin.
13. Her çukurcuğun optik yoğunluğunu 450 nm’de okuyun (referans filtre 620/630 nm). Mikro plakalar Durdurma Çözeltisi
eklendikten sonra 30 dakika içinde okunmalıdır.
11- KALİTE KONTROL (GEÇERLİLİK KRİTERİ)
Eşik Kontrol: Her Eşik Kontrol Serumu için O.Y ≥0.300 ve ≤0.800 olmalıdır.
Pozitif Kontrol: Pozitif Kontrol Serum indeksi 1,5’dan büyük olmalıdır.
OY Pozitif Kontrol (R5)
I=
Eşik Kontrol OY Ortalaması
Negatíf Kontrol: Negatif Kontrol Serum indeksi 0,4’den küçük olmalıdır.
OY Negatif Kontrol (R3)
I=
Eşik Kontrol OY Ortalaması
> 1,5
< 0,40
Herhangi bir kontrolün yukarıda açıklanan geçerlilik kriterine uymaması durumunda, test geçersizdir ve hasta örneği rapor
edilmemelidir. Operatör prosedürü gözden geçirdikten sonra testi tekrarlamayı veya daha fazla yardım almak için üreticiyle
temasa geçmeyi seçebilir. Eğer test tekrarlanırsa, aynı örnekten yeni bir parça tekrarlanan testte kullanılmalıdır.
Örnek Hesaplama:
Örnek
Absorbans (OY)
Negatif Kontrol (R3) OY
0.116
Eşik Kontrol (R4) OY
0.513
0.533
Pozitif Kontrol (R5) OY
1.834
Hesaplamalar
Eşik Kontrol Ortalama Değeri
Eşik Kontrol (R4) OY Otlamasını hesaplamak için , Eşik Kontrol tekrarları için OY değerlerini toplayın ve sonucu 2’ye bölün:
(0.513 + 0.533) ÷ 2 = 0.523
Negatif Kontrol İndeksi
Negatif Kontrol indeksini hesaplamak için, Negatif Kontrol OY, Eşik Kontrol OY Ortalamasına bölünmelidir:
I = 0.116 ÷ 0.523 = 0.22
7
Pozitif Kontrol İndeksi
Pozitif Kontrol indeksini hesaplamak için, Pozitif Kontrol OY, Eşik Kontrol OY Ortalamasına bölünmelidir:
I = 1.834 ÷ 0.523 = 3.51
Geçerlilik
Yukarıdaki örnekte:
 Her bir Eşik Kontrol OY ≥0.300 ve ≤0.800 şeklinde olduğundan Eşik Kontrol geçerlidir.
 Negatif Kontrol indeksi < 0.40 olduğundan, Negatif Kontrol geçerlidir.
 Pozitif Kontrol indeksi > 1.5 olduğundan, Pozitif Kontrol geçerlidir.
Sonuçlar her bir kontrol içinde geçerlilik kriterlerine uyduğundan, örnekteki test çalışması geçerli olarak kabul edilir.
12-SONUÇLARIN YORUMLANMASI
Test örneğinde galaktomannan varlığı veya yokluğu her hasta örneği için indeks hesaplamasıyla bulunur. İndeks (I), örneğin
OY değerinin Eşik Kontrol Serumu içeren çukurcukların optik yoğunluklarının ortalamasına bölünmesi ile bulunur.
Eşik Kontrol optik yoğunluk ortalamasının hesaplanması:
Eşik Kontrol Serumu (R4) içeren iki çukurcuğun optik yoğunluklarını toplayın ve toplamı 2’ye bölün.
Her test örneği için indeks (I) hesaplanması:
Her test örneği için aşağıdaki oranı hesaplayın:
I = örnek OY ÷ Kesme Kontrol OY Ortalaması
Serum/BAL sıvısının indeksi <0.5 ise yorumlanması:
Serum/BAL sıvısı indeksi < 0.50 olan örnekler galaktomannan antijen için negatif olarak kabul edilir.
Not: Negatif sonuç hastanın sonucunun test ile algılanabilir seviyenin altında olduğunu da gösterebilir.
Negatif sonuçlar İnvazif Aspergillosis teşhisinde kesin sonuç değildir. Eğer hastalık şüphesi varsa ama sonuç negatifse testin
tekrarlanması önerilir.
Serum/BAL sıvısının indeksi ≥0.5 ise yorumlanması:
Serum/BAL sıvısı indeksi ≥ 0.50 olan örnekler galaktomannan antijen için pozitif olarak kabul edilir.
Tüm pozitif hastalar için, aynı örnekten yeni bir parçanın tekrarlanmasının yanı sıra, takip testi için aynı hastadan yeni bir
örnek alınması tavsiye edilir.
Not: 0.000 değerinden küçük absorbans değerlendirilmesi gereken prosedür veya cihaz hatası gösterebilir. Test sonucu
geçersizdir ve örnek tekrar çalışılmalıdır.
Hassasiyet ve erken pozitif testi artırmak için, yüksek riskli hastalarında düzenli olarak taranması (haftada iki kez) tavsiye
edilir.
Not: Lütfen unutmayın Platelia™ Aspergillus Ag invazif Aspergillosis teşhisinde yardımcı olarak kullanılmak içindir. Platelia™
Aspergillus Ag ile elde edilen pozitif sonuçlar mikrobiyolojik kültür, biyopsi örneklerinin histolojik incelemesi ve radyografik
bulgular gibi diğer teşhis prosedürleriyle bir arada değerlendirilmelidir.
Örnek Hesaplama:
Örnek
Absorbans (OY)
Negatif Kontrol (R3) OY
0.116
Eşik Kontrol (R4) OY
0.51
0.533
Pozitif Kontrol (R5) OY
1.834
Hasta Örneği #1
0.134
Hasta Örneği #2
0.436
Hasta Örneği #3
1.196
Hesaplamalar
Test kontrollerinin geçerliliğinin belirlenmesi için örnek hesaplamayı görmek için Kalite Kontrol (Geçerlilik Kriteri) bölümüne
bakın.
Eşik Kontrol Ortalaması Değeri
Eşik Kontrol (R4) OY Otlamasını hesaplamak için , Eşik Kontrol tekrarları için OY değerlerini toplayın ve sonucu 2’ye bölün:
(0.513 + 0.533) ÷ 2 = 0.523
8
Hasta Örneği #1
Hasta Örneği #1 indeksini hesaplamak için, Hasta Örneği #1 OY, Kesme Kontrol OY Ortalamasına bölünmelidir: I =
0.134 ÷ 0.523 = 0.26
Bu örnekte indeks 0.236< 0.50 olduğu için Hasta Örneği #1 negatiftir.
Hasta Örneği #2
0.436 ÷ 0.523 = 0.83
Bu örnekte indeks 0.83 ≥0.50 olduğu için Hasta Örneği #2 pozitiftir.
Hasta Örneği #3
1.196 ÷ 0.523 = 2.29
Bu örnekte indeks 2.29 ≥ 0.50 olduğu için Hasta Örneği #3 pozitiftir.
13- PROSEDÜRÜN KISITLAMALARI
1. Serum ve/veya BAL sıvısı örnekleri için negatif test İnvazif Aspergillosis teşhisinde kesin sonuç değildir. Invazif
Aspergillosis riski olan hastaların serum örnekleri haftada iki kez test edilmelidir.
2. Platelia™ Aspergillus Ag Prosedürü ve Sonuçların yorumlanması galaktomannan antijen bulunan test örnekleri için takip
edilmelidir. Kit kullanıcısının testi yapmadan önce paketin içindekileri dikkatle okuması gereklidir. Özellikle, örnek ve
reaktif pipetleme, plaka yıkama ve inkübasyon adımlarının zamanlaması için test prosedürü dikkatle takip edilmelidir.
3. Örnek veya reaktifin prosedürde açıklanan şekilde eklenmemesi yanlış negatif teste yol açabilir. İnvasif Aspergillosis
için klinik şüphe olduğunda veya prosedür hatalarında ilave örneklerin testleri tekrarlanmalıdır.
4. Mikro plaka ile ilgilenirken dikkatli olunmadığı takdirde veya reaktif eklerken pipetleme tekniği kötüyse, çukurcuklardan
birinin içindekilerin diğer çukurcuğa dökülerek negatif hasta örnek çukurcuklarının pozitif kontrol/hasta çukurcuklarının
içindekilerle kontaminasyonu mümkündür.
5. Platelia™ Aspergillus Ag performansı neonatal örnekler ile değerlendirilmemiştir. Neonatal popülasyondan alınan
örneklerde Avrupa Literatürlerinde çok fazla yalancı pozitif galaktomannan sonucu rapor edildiği yazmaktadır 13, 15, 33,44.
6. Platelia™ Aspergillus Ag kronik granülomatoz hastalığı veya Job’s sendromu olan hastalarda galaktomannan algılama
konusunda daha zayıf performans gösterebilir 56, 58.
7. İnvazif Aspergillosisli bazı hastalarda küf aktif anti mantar terapisinin konkominant kullanımı Platelia™ Aspergillus Ag
hassasiyetini azaltabilir 30,31.
8. Platelia™ Aspergillus Ag plazma veya idrar ya da CSF gibi diğer örnek türleri için değerlendirilmemiştir.
9. Platelia™ Aspergillus Ag performansı manuel okuma ve/veya görsel tanımlama için oluşturulmamıştır.
10. Penicillium, Alternaria, Paecilomyces, Geotrichum ve Histoplazma gibi diğer mantar türleri Aspergillus galaktomannan
teşhisi için testte kullanılan rat, EBA-2 monoklonal antibadiler ile reaktivite göstermiştir. Amerika Birleşik Devleri’nin
bölümleri dahil endemik alanlarda histoplazma dikkate alınmalıdır 36, 50, 59.
11. BAL sıvısı örneklerinin Mycoplasma pneumoniae veya boyun/boğaz alanlarını hissizleştirmek için kullanılan
uyuşturucu/yağlar ile çapraz reaksiyon verdiği gözlenmemiştir.
12. Klinik işaret olmadan pozitif reaksiyon:
Klinik ve/veya radyolojik özelliklerin belirlenmesinden önce serum veya BAL’ da galaktomannan antijen bulunması
dikkate alındığında, genellikle klinik bulgularla pozitif reaksiyon gözlenir: Kanıtlanmış kişiler için "gerçek pozitif" testlere
karşılık gelirler veya daha sonra olası İnvazif Aspergillosis teşhisi oluşur 30
Bununla birlikte, bazı durumlarda bazı faktörler test yorumlanırken dikkate alınmalıdır:
a. Klinik bulgu olmadan pozitif reaksiyonlar özellikle küçük çocuklarda rapor edilmiştir44. Her ne kadar bu vakaların
bazıları gerçek Aspergillus antijenleri ile alakalıysa da, çoğu vaka hatalı pozitif olarak değerlendirilmiştir.
b. Galaktafuranoz çeşitli gıdalarda, özellikle tahıllarda, tahıl ürünlerinde ve kremalı tatlılarda bulunur 1, 27. İnsan
sütünden farklı olarak insani özellikler verilmiş sütler sıklıkla yüksek konsantrasyonda galaktomannan içerir13. Bu
yüzden küçük çocuklarda ve daha genel olarak barsak bariyeri müdahalesi geçirmiş hastalarda antijen
yorumlama sırasında beslenme özellikleri dikkate alınmalıdır 6, 13. Klinik bulguların eşlik etmediği pozitif antijen bu
tür hasta popülasyonlarında daha dikkatli yorumlanmalıdır .
c. Piperacillin / tazobactam tedavisi uygulanan hastalarda pozitif galaktomannan test sonuçları rapor edilmiştir.
Ayrıca galaktomannan antijen için pozitif olduğu tespit edilmiş belirli piperacillin / tazobactam lotları veya partileri
de rapor edilmiştir. Bu yüzden piperacillin / tazobactam kullanan hastaların pozitif test sonuçları dikkatle
yorumlanmalı ve diğer teşhis metotları ile doğrulanmalıdır. Galaktomannan bulgusu bazı amoxicillin partilerinde
klavulanik asit parenteral ürünlerle ilişkili olarak da tespit edilmiştir. Bu yüzden yarı sentetik ßlaktam tedavileri test yorumlanırken dikkate alınmalıdır 1, 3,32.
Platelia™ Aspergillus Ag galaktomannan antijenini klinik veya radyolojik belirtilerden çok önce tespit
edebildiğinden, İnvazif Aspergillosis oluşumu göz ardı edilemez. Bu yüzden, piperacillin / tazobactam tedavisi
gören test sonucu pozitif olan hastalar dikkatle takip edilmelidir.
d. Klinik bulgular yokken parenteral veya oral yollarla (barsak bariyeri müdahalesi durumunda) galaktomannan
ürünleri alan hastalarda pozitif reaksiyonlar gözlenebilir.
Bu ürünlerdeki galaktomannan varlığı genellikle mantar mikroorganizmalara dayalı bir fermantasyon prosesi ile
açıklanır.
Bununla birlikte ekzojen galaktomannan konsantrasyonu testin eşik değerine ulaşıncaya veya geçinceye kadar
pozitif sonuç gözlenmeyecektir.
Bu yüzden, diğer klinik bulguların yokluğun da şüpheli pozitif sonuç varsa, hastanın almakta olduğu ürünlerin,
özellikle üretim proseslerinin ve kullanılan ham maddelerin incelenmesini öneririz 14, 41, 39.
9
13. Bir çok çalışmada gözlenmiştir ki PLASMA-LYTE™ ile birleşen bronkoalveoler lavaj sıvısı ve serumda bulunan
galaktomannan için pozitif reaksiyonlar rapor edilmiştir14, 41. Bu nedenle testing sonuçlarının yorumlanmasında herhangi
bir PLASMA-LYTE var ise dikkatli olunmalıdır.
14. Immunocompromised hastalardan alınan bronkoalveoler lavaj sıvısı örneklerinde Platelia™ Aspergillus Ag’nin sonuçları
dikkatli yorumlanmalıdır37.
15. Sonuçlar eşik değer indeksine (0,5) yakın ise dikkatlice yorumlanmalı ve diğer klinik, radyolojik veya invaziv
aspergillus’un laboratuvar bulguları sonucu desteklemelidir. Bu testing yorumlanmasında şüpheli böllge
tanımlanmamıştır.
16. İlave olarak bronkoalveoler lavaj sıvısı örneklerinde Platelia™ Aspergillus Ag’nin sonuçları 0.5-1.0 indeks aralığında ise
düşük değerlidir. BAL numunelerinin sonucu 1.0 indeksinden büyük olmalıdır. Bu nedenle 0.5-1.0 indeksine sahip
değerler tekrar gözden geçirilmeli ve diğer klinik, radyolojik veya invazif aspergillus’un laboratuvar bulgularıyla
desteklenmelidir8, 17.
14-BEKLENEN DEĞERLER
I.SERUM
İnvazif Aspergillosis için beklenen değerler hasta popülasyonuna bağlı olarak değişir; %5-20% arası değerler rapor edilmiştir
10, 16
.
Aşağıdaki sonuçlar , Kuzey Amerika’daki yetişkin hastalar ve Amerika’daki pediatric hastalar (21 yaşın altında) üzerinde
yapılan klinik çalışmalardan elde edilmiştir.
A- Pediatrik Hastalar
Klinik çalışma toplam 1954 serum numunesi üzerinde yapıdı. Bu numuneler 129 tane immunocompromise pediatrik (21 yaş
altı) hastalardan alınmıştır, yüksek invazif Aspergillosis riski olan hastalar, İnvazif Aspergillosis teşhisi konmuş veya ihtimali
olan hastalar. Platelia™Aspergillus Ag’nin karakteristik özelliklerini belirlemek için Amerika’da üç test merkezinde çalışıldı.
Bu popülasyon için değer indekslerinin dağılımı aşağıdaki grafikde gösterilmiştir.
İnvazif Aspergillosis teşhisi konmamış pediatrik hastalar (Kontrol popülasyonu)
Serum Sayısı
Pediyatrik Kontrol Popülasyonundan (N=1625)
Serum İndeks Değeri Dağılımı
İndeks
Şekil 1: 108 tane immuno-compromise pedriatrik hastadan alınan toplam 1625* pediatric serum örneğinden elde edilen,
Amerika’da Platelia™Aspergillus Ag’nin karakteristik performansını belirlemek için üç test merkezinde çalışılan sonuçlar.
Numuneler için indeks değerlerinin dağılımı yukarıdaki grafikde gösterilmiştir.
Note: 80 tane örnek, 4 tane galactomannan antijeni için pozitif sonuçlu kontrol hastası
10
İnvazif Aspergillosis teşhisi konmuş pediatrik hastalar
Şekil 2: EORTC/NIAID belirleme ile invazif Asperrgillosis olduğu belirlenmiş 17 hastadan alınan 249 serum numunesinin
galactomannan testi sonuçlarını gösteren taranmış şekiller. Pozitif olduğu beklenen her hastadan alınan serumlar değil.
Çeşitli hasta popülasyonlarında Invazif Aspergillosis’in beklenen yaygınlığı %5-20 aralığında olduğu rapor edilmiştir10, 24. Bu
çalışmanın yaygınlık oranı %13,6 idi.
İndeks
Kanıtlanmış Olası Pediyatrik Asperjiloz İndeks Pediyatrik
Hasta (N=17) Dağılımı
Hasta Numarası
B- Yetişkin Hastalar
Klinik çalışma toplam 1724 serum numunesi üzerinde yapıdı. Bu numuneler 172 tane kemik iliği nakli yapılmış, ve lösemi
hastalarından alınmıştır, invazif Aspergillosis teşhisi koyulan veya koyulmayan hastalardır. Platelia™Aspergillus Ag’nin
karakteristik performansını belirlemek için Kuzey Amerika’da üç test merkezinde çalışıldı. Bu popülasyon için değer
indekslerinin dağılımı aşağıdaki grafiklerde gösterilmiştir.
İnvazif Aspergillosis teşhisi konmamış yetişkin hastalar (Kontrol popülasyonu)
Şekil 3: 143 tane kemik iliği nakli yapılmış ve lösemi hastasından alınan toplam 1262 serum örneğinden elde edilen, Kuzey
Amerika’da Platelia™Aspergillus Ag’nin karakteristik performansını belirlemek için üç test merkezinde çalışılan sonuçlar.
Numuneler için indeks değerlerinin dağılımı aşağıdaki grafikde gösterilmiştir.
Serum Sayısı
Yetişkin Kontrol Popülasyonundan (N=1262)
Serum İndeks Değeri Dağılımı
İndeks
11
İnvazif Aspergillosis teşhisi konmuş yetişkin hastalar
Şekil 4: EORTC/NIAID belirleme ile invazif Asperrgillosis olduğu belirlenmiş 19 hastadan alınan 462 serum numunesinin
galactomannan testi sonuçlarını gösteren taranmış şekiller. Pozitif olduğu beklenen her hastadan alınan serumlar değil.
Çeşitli hasta popülasyonlarında Invazif Aspergillosis’in beklenen yaygınlığı %5-20 aralığında olduğu rapor edilmiştir10, 24. Bu
çalışmanın yaygınlık oranı %16,9 idi.
İndeks
Kanıtlanmış Olası Yetişkin Asperjilozu İndeks
Yetişkin Hasta (N=29) Dağılımı
Hasta Numarası
Aşağıdaki grafikler invazif aspergillosis’in septomlarını veya klinik işaretlerini göstermeyen hastalara örnektir ve invazif
Aspergillosis olduğu kanıtlanmıştır veya ihtimali vardır (Aspergillus pozitif).
Şekil 5: Negatif hasta
İndeks
Kontrol Hastası
Gün
Şekil 6: Pozitif hasta
İndeks
Kanıtlanmış invaziv asperjiloz hastası
Gün
12
II.BAL SIVISI
Bronkoalveoler Lavaj sıvısı ile Platelia™ Aspergillus Ag kitinin performans özelliklerini belirlemek için Amerika’da invazif
aspergillosis pozitif veya negatif akciğer nakli yapılmış ve katı organ transferi yapılmış 178 hastadan alınan 449 BAL
numunesi ile çalışma yapılmıştır.
Bunlardan 167 katı organ ve akciğer nakli yapılmış invazif aspergillosis negatif hastaların 403 tane BAL numunesi.
İlave olarak , invazif aspergillosis olma ihtimali olan veya kanıtlanmış Amerika dışından 58 hasta üzerinde de çalışmalar
yapılmıştır. BAL numuneleri üzerinde geçmişe ait analizler çalışılmıştır ve bu hastalar 99 tanedir ve hematoloji hastalarıdır.
Katı organ nakli ve akciğer nakli yapılmış invazif aspergillosis’I negatif BAL numuneleri için beklenen değerler aşağıdaki
tabloda verilmiştir. Organ nakli yapılmış hastalardan alınan numunelerin sonuçları mold kolonizasyonu yapılmış ve
yapılmamış olarak alınmıştır.
Tablo1:
Numune ile beklenen değerler
İnvazif Aspergillosis negatif olan katı organ nakli yapılan ve akciğer nakli yapılan hastalar birleştirildi.
N= 403 BAL sıvısı
Teşhis
Kolonizasyonsuz kontroller
Kolonizasyonlu kontroller
Toplam kontrol
N
341
62
403
Pozitif (%)
11/341(%3.2)
12/62(%19.4)
23/403(%5.7)
Negatif (%)
330/341(%96.8)
50/62 (%80.6)
380/403(%94.3)
İnvazif Aspergillosis negatif olan katı organ nakli yapılan ve akciğer nakli yapılan hastalar birleştirilerek BAL numunelerinde
beklenen değerler aşağıdaki tabloda belirtildi.
.
Tablo2:
Nakil çeşidine göre invazif Aspergillosis negatif olan katı organ nakli yapılan ve akciğer nakli yapılan hastalar birleştirildi.
Nakil çeşidi
Kalp
Böbrek
Karaciğer
Akciğer
Toplam kontrol
N
28
25
23
327
403
Pozitif (%)
3/28(%10.7)
3/25(%12.0)
1/23(%4.3)
16/327(%4.9)
23/403(%5.7)
Negatif (%)
25/28(%89.3)
22/25 (%88.0)
22/23(%95.7)
311/327(%95.1)
380/403(%94.3)
İnvazif Aspergillosis negatif olan 41 tane hematolojik hastalığı olan hastalardan alınan toplam 41 tane BAL numunelerinde
beklenen değerler aşağıdaki tabloda belirtildi.
Tablo3:
İnvazif Aspergillosis negatif hematolojik hastalığı olan hastalar
N= 41 BAL sıvısı
Teşhis
Kontrol
N
41
Pozitif (%)
8/41(%19.5)
Negatif (%)
19/41(%80.5)
15.ÖZEL PERFORMANS KARAKTERLERİ
A.TEKRARLANABİLİRLİK
a) Serumda Tekrarlanabilirlik Çalışmaları
Platelia™ Aspergillus Ag için çalışmalar arası ve çalışma içi değişiklikler , 6 tane panel şeklinde hasta serumu numunesi
havuzu kullanarak (bir negatif, bir düşük pozitif, iki pozitif, iki yüksek pozitif) Kuzey Amerika’da üç klinikde yapılan
çalışmalardan elde edilen sonuçlar kullanılmıştır. 6 panelin her biri 3 farklı günde 3’er defa ve bir partide iki taraftan test
edildi (her bir tarafta toplam 9 tekrar=9). 6 panelin her biri 3 farklı günde, bir partide, üçüncü tarafta iki defa çalışıldı (Üçüncü
tarafta çalışılan toplam tekrar sayısı=6). Her tarafta prezisyonları çalışmak için 1 operator çalıştı. Veriler, Klinik Laboratuvar
Standartları Enstitüsü (CLSI) Ulusal Komitesi Klinik Laboratuvar Standartlarına (NCCLS) göre analiz edildi. Her bir panelde
ortalama optik yoğunluk (OY), ortalama indeks değeri, standard sapma (SD), varyasyon katsayısı yüzdesi (%CV), çalışma içi
ve çalışmalar arası prezisyonlar aşağıdaki tablolarda belirtilmiştir.
13
Tablo4:
Saha 1
Panel
Üyesi
Neg
N
Ortalama
Seyir İçi
(deney
içi)1 SD
%CV
Toplam
(deneyler
arası)2
SD
%CV
Düşük Poz
OD
9
0.052
İndeks
9
0.09
OD
9
0.445
0.002
0.00
N/A
N/A
0.036
N/A
Poz. 1
Poz. 2
İndeks
9
1.17
OD
9
0.931
0.059
0.09
8.4%
7.6%
0.08
0.070
10.4%
10.0%
Yüksek Poz. 1
İndeks
9
1.563
OD
9
1.227
0.044
0.08
4.7%
5.1%
0.14
0.044
11.6%
4.7%
Yüksek Poz. 2
İndeks
9
2.06
OD
9
2.887
0.051
0.09
4.2%
4.4%
0.25
0.058
15.7%
4.7%
Neg Kontrol
İndeks
9
4.83
OD
3
0.046
İndeks
3
0.08
0.089
0.17
N/A
N/A
3.1%
3.6%
N/A
N/A
0.29
0.169
0.58
N/A
N/A
14.3%
5.9%
11.9%
N/A
N/A
CO Kontrol
OD
6
0.606
Poz. Kontrol
İndeks
9
0.74
OD
9
0.702
İndeks
6
1.00
OD
3
2.216
İndeks
3
3.67
0.022
0.03
4.8%
4.4%
0.02
0.03
N/A
N/A
3.7%
3.4%
N/A
N/A
0.04
0.051
0.102
0.03
0.317
0.12
N/A
11.5%
16.9%
2.8%
14.3%
3.3%
OD
9
0.040
İndeks
9
0.10
OD
9
0.280
İndeks
9
0.70
OD
9
0.364
İndeks
9
0.89
OD
9
0.602
İndeks
9
1.49
OD
9
0.801
İndeks
9
2.01
OD
9
1.361
İndeks
9
3.43
OD
3
0.074
İndeks
3
0.18
OD
6
0.415
İndeks
6
1.00
OD
3
1.197
İndeks
3
2.97
0.006
0.01
0.041
0.09
0.023
0.07
0.045
0.11
0.046
0.10
0.047
0.11
N/A
N/A
0.00
0.01
N/A
N/A
N/A
N/A
14.5%
13.0%
6.4%
7.6%
7.5%
7.1%
5.7%
4.8%
3.5%
3.2%
N/A
N/A
1.1%
1.1%
N/A
N/A
0.006
0.03
0.058
0.19
0.083
0.18
0.057
0.28
0.042
0.53
0.079
1.00
N/A
N/A
0.094
0.01
0.068
0.54
N/A
N/A
20.8%
27.0%
22.7%
19.8%
9.5%
18.7%
5.3%
26.5%
5.8%
29.2%
N/A
N/A
22.7%
0.9%
5.7%
18.2%
OD
6
0.049
İndeks
6
0.10
OD
6
0.388
0.003
0.01
0.009
0.02
N/A
N/A
2.4%
2.4%
0.012
0.03
0.078
0.13
N/A
N/A
20.0%
15.8%
Saha 2
Panel
Üyesi
Neg
N
Ortalama
Seyir İçi
(deney
içi)1 SD
%CV
Toplam
(deneyler
arası)2
SD
%CV
Düşük Poz
Poz. 1
Poz. 2
Yüksek Poz. 1
Yüksek Poz. 2
Neg Kontrol
CO Kontrol
Poz. Kontrol
Saha 3
Panel
Üyesi
Neg
N
Ortalama
Seyir İçi
(deney
içi)1 SD
%CV
Toplam
(deneyler
arası)2
SD
%CV
Düşük Poz
İndeks
6
0.81
Poz. 1
OD
6
0.652
Poz. 2
İndeks
6
1.36
OD
6
0.830
0.082
0.17
12.5%
12.2%
0.068
10.5%
Yüksek Poz. 1
İndeks
6
1.73
OD
6
1.158
0.068
0.14
8.2%
8.2%
0.15
0.104
11.1%
12.5%
Yüksek Poz. 2
İndeks
6
2.41
OD
6
2.378
0.094
0.20
8.1%
8.2%
0.25
0.082
14.3%
7.1%
Neg Kontrol
CO Kontrol
İndeks
6
4.96
OD
3
0.059
İndeks
3
0.12
OD
6
0.480
0.126
0.25
N/A
N/A
5.3%
5.1%
N/A
N/A
0.15
0.111
0.34
N/A
6.2%
4.7%
6.8%
N/A
Poz. Kontrol
İndeks
6
1.00
OD
3
1.652
İndeks
3
3.45
0.028
0.06
N/A
N/A
5.8%
5.8%
N/A
N/A
N/A
0.028
0.04
0.056
0.23
N/A
5.8%
4.1%
3.4%
6.6%
N/A = geçerli değil
1
2
NCCLS EP5-A, Cilt 19, No. 2; Sayfa 24, Denklem (C2)
NCCLS EP5-A, Cilt 19, No. 2; Sayfa 25, Denklem (C3) ve Denklem (C4)
14
b) BAL Sıvısında Tekrarlanabilirlik
Platelia™ Aspergillus Ag için çalışmalar arası ve çalışma içi değişiklikler , 4 tane panel şeklinde BAL sıvısı numunesi havuzu
kullanarak (bir negatif, bir yüksek negatif, bir düşük pozitif, bir orta pozitif) üç farklı bölgede (iki Amerika, bir internal bölge)
yapılan çalışmalardan elde edilen sonuçlar kullanılmıştır. 4 panelin her biri 5 farklı günde 2’şer defa ve bir partide iki defa
çalışılarak tek parti üzerinde test edildi (her bir partide toplam sonuç=120). Her tarafta prezisyonları çalışmak için 2 operatör
çalıştı. Veriler, Klinik Laboratuvar Standartları Enstitüsü (CLSI) Ulusal Komitesi Klinik Laboratuvar Standartlarına (NCCLS) göre
analiz edildi. Her bir panelde ortalama optik yoğunluk (OY), ortalama indeks değeri, standard sapma (SD), varyasyon katsayısı
yüzdesi (%CV), çalışma içi ve çalışmalar arası prezisyonlar aşağıdaki tabloda belirtilmiştir.
Tablo 5Birleştirilen Çalışma Özeti
N= 60
OD
İndeks
Yüksek
Negatif
N=60
OD
İndeks
0.121
0.29
0.214
0.50
0.375
0.88
0.575
1.35
1.580
3.72
0.047
0.11
Negatif
Özeti
Ortalama
Düşük
Pozitif
N=60
OD
Orta Pozitif
Pozitif Kontrol
İndeks
N=60
OD
İndeks
N=60
OD
İndeks
Negatif
Kontrol
N=60
OD
İndeks
Döngü İçi
(Deney
İçi)
SD
N/A
N/A
0.037
0.103
0.035
0.078
0.029
0.067
0.111
0.265
N/A
N/A
%CV
N/A
N/A
1.74%
20.5%
9.3%
8.9%
5.0%
5.0%
7.0%
7.1%
N/A
N/A
Toplam
(Deneyler
Arası)
SD
N/A
N/A
0.042
0.095
0.061
0.122
0.070
0.138
0.190
0.438
N/A
N/A
%CV
N/A
N/A
19.6%
18.9%
16.2%
13.9%
12.2%
10.2%
12.0%
11.8%
N/A
N/A
.
B. ÇAPRAZ REAKSİYON
Bir parti Platelia™ Aspergillus Ag kiti ile İnvazif Aspergillosis’in potansiyel olarak interfere özelliği olan medikal şartlarla ilgili
çalışma yapıldı. Aşağıdaki serum numunelerinde Platelia™ Aspergillus Ag için çapraz reaksiyon testi yapıldı. Toplam 151
numune kullanıldı.
Tablo 6
Patoloji
Test Edilen Numune Sayısı
Pozitiflerin Sayısı
Romatoid Faktörü
10
0
ANA Pozitif
10
0
IgG Hipergammaglobulinemi
10
0
IgM Hipergammaglobulinemi
10
0
Kanser*
11
0
Viral Olmayan Siroz (primer bilyer; alkole bağlı;
ilaca bağlı)
10
0
Çoklu Transfüzyonlar
10
0
Multipar Kadınlar
10
0
HAV
10
0
HCV
10
0
Kızamıkçık
10
0
CMV
10
0
Frengi (RPR+)
10
0
Toksoplazmoz
10
0
Mikoplazma
10
0
* Mesane, göğüs (2), kolon, endometriyal, akciğer, prostat, böbrek ve skuamöz(3)'ün her birinden bir tane.
15
C.KLİNİK TEST
Kuzey Amerika’daki Klinik Çalışmalar
SERUM NUMULERİ
Platelia™ Aspergillus Ag’nin sensitivite ve spesifitesini değerlendirmek için klinik çalışmalar; Kuzey Amerika’da üç bölgede
yetişkin hastalar üzerinde, Amerika’da üç bölgede pediatrik hastalar (21 yaş altı) üzerinde yapıldı. Çalışmalar 129 pediatrik
hastadan toplam 1954 serum numunesi alınarak ve 172 yetişkin hastadan toplam 1724 serum numunesi alınarak yapıldı. Hasta
popülasyonu* aşağıdaki gibidir.
 İnvazif Aspergillosis negatif olan hastalar (kontrol hastası)
 İnvazif Aspergillosis ihtimali olan hastalar
 İnvazif Aspergillosis pozitif olan hastalar
* Avrupa Kanser Tedavi ve Araştırma Organizasyonu (EORTC) İnvazif Mantar Enfeksiyon Birliği Grubu (IFIGG) ve Ulusal
Enfeksiyon Hastalıkları ve Alerji Enstitüsü (NIAID), hematolojik hastalarda İnvazif Aspergillosis’in teşhis kriterlerini 2002 yılında
belirledi 2,39.
SENSİTİVİTE
A.Pediatrik
Hasta sensitivitesini belirlemek için sonuçlar bu çalışmada analiz edildi. İnvazif Aspergillosis ihtimali olan veya pozitif olan 17
pediatrik hastadan 3 bölgede Platelia™ Aspergillus Ag’nin sensitivite testi yapılmıştır.
Tablo 7
Tanı
Hasta sayısı
Hassasiyet
%95 Güven Aralığı
Kanıtlanmış Asperjiloz
9
44.4% (4/9)
18.9-73.3%
Olası Yetişkin Asperjilozu
8
62.5% (5/8)
30.6-86.3%
Birleşik Kanıtlanmış ve Olası Asperjiloz
17*
52.9% (9/17)
31.0-73.8%
* Not: 17 hastanın 8’I Aspergillus galactomannan antijeni için negative sonuç verdi. Negatif Aspergillus galactomannan antijeni
için negative olan 8 hastanın hepsi anti mantar ajanlarına karşı tedavi almıştır. Anti mantar tedavisi gören bazı hastalarda İnvazif
Aspergillosis’in sensitivitesinin azalabildiği gözlenmiştir2,31
B.Yetişkin
Platelia™ Aspergillus Ag kullanarak üç bölgede toplam 29 tane ilik nakli yapılmış ve lösemi olan yetişkin hastalardan alınan
örneklerle sensitivite çalışması yapılmıştır ve bu hastaların İnvazif aspergillosis’I şüpheli veya pozitif’dir.
Tablo 8
Tanı
Hasta sayısı
Hassasiyet
11
81.8% (9/11)
52.3-94.9%
18
77.8% (14/18)
54.8-91.0%
Birleşik Kanıtlanmış ve Olası
Asperjiloz
29
79.3% (23/29)
61.6-90.2%
16
SPESİFİTE
A.Pediatrik
Pediatrik hastalarda Spesifite
İnvazif Aspergillosis’I negative olan (control hastaları), 108 pediatrik hastada 3 bölgede Platelia™ Aspergillus Ag ile spesifite
çalışması yapıldı.
Tablo 9
Saha
Hasta sayısı
Özgünlük
1
44
86.4 % (38/44)
73.3-93.6%
2
59
86.4 % (51/59)
75.5-93.0%
3
5
100% (5/5)
56.6-100%
Birleşik Saha
108
87.0% (94/108)
79.4-92.1%
Note: 4 hasta galactomannan antijeni pozitif ( piperacillin/tazobactam tedavisi alan hastalar hariç)
Pediatrik numunelerde Spesifite
İnvazif Aspergillosis’I negative olan (control hastaları), 108 pediatrik hastada toplam 1625 numune ile 3 bölgede Platelia™
Aspergillus Ag ile spesifite çalışması yapıldı.
Tablo 10
Saha
Numune sayısı
Özgünlük
1
794
98.9% (785/794)
97.9-99.4%
2
731
97.8% (715/731)
96.5-98.6%
3
100
100% (100/100)
96.3-100%
Birleşik Saha
1625
98.5% (1600/1625)
97.7-99.0%
Note: 4 hastadan alınan 80 numune ile galactomannan antijeni pozitif ( piperacillin/tazobactam tedavisi alan hastalar hariç)
B.Yetişkin
Yetişkin hastalarda Spesifite
İnvazif Aspergillosis’I negative olan (control hastaları), 143 ilik nakli yapılmış ve lösemi olan yetişkin hastada 3 bölgede Platelia™
Aspergillus Ag ile spesifite çalışması yapıldı.
Tablo 11
Saha
Hasta sayısı
Özgünlük
1
28
78.6% (22/28)
60.5-89.8%
2
77
93.4% (71/77)
84.0-96.4%
3
38
89.5% (34/38)
75.9-95.8%
Birleşik Saha
143
88.8% (127/143)
82.9-93.0%
17
Yetişkin numunelerinde Spesifite
İnvazif Aspergillosis’I negative olan (control hastaları), 143 ilik nakli yapılmış ve lösemi olan yetişkin hastadan alınan toplam 1262
numune ile 3 bölgede Platelia™ Aspergillus Ag ile spesifite çalışması yapıldı.
Tablo 12
Saha
Numune sayısı
Özgünlük
1
349
98.0% (342/349)
95.9-99.0%
2
560
98.6% (552/560)
97.2-99.3%
3
353
98.9% (349/353)
97.1-99.6%
Birleşik Saha
1262
98.5% (1243/1262)
97.0-99.0%
TAHMİNİ DEĞER
Bu çalışmada hasta opülasyonu için pozitif ve negatif tahmini değerler analiz edildi. Yetişkinler için % 16,9 yaygınlık oranı ve
pediatrikler için %13,6 yaygınlık oranı baz alınarak çalışma yapıldı.
Pozitif ve negative tahmini değerler aşağıdaki gibi hesaplandı.
A. Pediatrikler
%13,6 Yaygınlık çalışması
PPV: %39,1
%95 Confidence Interval: %22,2-59,2
NPV: %92,2
B. Yetişkinler
PPV: %59,0
NPV: %95,5
Çeşitli hasta popülasyonunda İnvazif Aspergillosis’in beklenen yaygınlık oranı % 5-20 olarak rapor edildi 10,24 . Yayınlanmış olan
son yaygınlık’dan sonra hasta popülasyonu için, negative ve pozitif tahmini değerler dikkate alınarak daha düşük yaygınlık oranı
%5.0 olarak hesaplandı.
A.Pediatrikler
PPV: %17,6
NPV: %97,2
B.Yetişkinler
PPV: %27,2
NPV: %98,8
II. BAL SIVI NUMUNESİNDE PERFORMANS ÖZELLİKLERİ
Platelia™ Aspergillus Agnin BAL sıvı numunesi ile yapılan sensitivite ve spesifite çalışmaları 2 parti halinde Amerika’da yapıldı.
Amerika’da yapılan bu çalışmalarda akciğer transferi yapılmış 116 hastadan 333 numune ve katı organ transferi yapılmış 62
hastadan 116 numune alınarak yapılmıştır. Amerika dışında yapılan diğer bir çalışmada ise invasif aspergillosis’i negatif ve pozitif
olan 99 tane yüksek riskli hematoloji hastalarından 99 numune alınarak yapıldı.
A.Sensitivite
Sensitivite çalışması, EORTC/MSG kriterlerine göre invasif aspergillosis’i pozitif olan hematolojik hastalarda, katı organ taransferi
yapılmış ve akciğer nakli yapılmış hastalardan alınan numunelerle yapılmıştır.
İnvazif Aspergillosis’i pozitif katı organ transferi yapılan hastalar
Bir çalışmada katı organ transferi yapılan 62 hastadan alınan toplam 116 numune ile sensitivite çalışması yapılmıştır ve bu
çalışmanın sonuçları aşağıdaki tabloda gösterilmiştir. Bu hastaların 5 tanesinin invazif Aspergillosis’i pozitif bulunmuştur.
18
Tablo 13
Platelia™ Aspergillus Ag’nin Sensitivitesi
Katı organ nakli yapılan hastalarda Invazif Aspergillosis’in pozitif ve pozitif olma olması mümkün.
Tanı
N
İndeks ≥ 0,5
Hassasiyet
2
2
2/2 (100%)
34.2 - 100%
3
3
3/3 (100%)
43.8 - 100%
5
5
5/5 (100%)
56.5 - 100%
Birleşik
Kanıtlanmış
Olası Asperjiloz
ve
Tablo 14
Transfer ile katı organ nakli yapılan hastalarda Invazif Aspergillosis’in pozitif ve pozitif olma olması mümkün.
Organ Nakli Tipi
N
İndeks ≥ 0,5
Hassasiyet
Kalp
1
1
1/1 (100%)
20.6 - 100%
Böbrek
3
3
3/3 (100%)
43.8 - 100%
Karaciğer
1
1
1/1 (100%)
20.6 - 100%
Toplam
5
5
5/5 (100%)
56.5 - 100%
İnvazif Aspergillosis’i pozitif Akciğer nakli yapılmış hastalar
Bir diğer çalışmada akciğer nakli yapılan 116 hastadan alınan toplam 333 numune ile sensitivite çalışması yapılmıştır ve bu
çalışmanın sonuçları aşağıdaki tabloda gösterilmiştir. Bu hastaların 6 tanesinin invazif Aspergillosis’i pozitif bulunmuştur.
Tablo 15
Akciğer nakli yapılan hastalarda Invazif Aspergillosis’in pozitif ve pozitif olma olması mümkün.
Tanı
N
2
1
İndeks ≥ 0,5
1/2 (50.0%)
Hassasiyet
9.4 - 90.6%
Birleşik Kanıtlanmış ve
Olası Asperjiloz
4
3
3/4 (75.0%)
30.0 - 96.4%
6
4
4/6 (66.7%)
30.0 - 90.3%
İnvasif Aspergillosis’i pozitif Hematolojik Hastalar
Sensitivite çalışması 58 tane hematolojik hastadan alınan 58 numune ile sensitivite çalışması yapılmıştır ve bu çalışmanın
sonuçları aşağıdaki tabloda gösterilmiştir. Bu hastaların invazif Aspergillosis’i pozitif bulunmuştur. Bu çalışma Platelia™
Aspergillus EIA kullanarak yüksek riskli hematoloji hastalarından alınan BAL sıvısı ile yapılmıştır.
BAL sıvısında Platelia™ Aspergillus EIA’nın hasaplanan performans özellikleri yayınlanmıştır29.
Tablo 16
Invazif Aspergillosis’in pozitif ve pozitif olma olması mümkün hematolojik hastalar.
Tanı
N
İndeks ≥ 0,5
Hassasiyet
31
31
31/31 (100%)
89.0 - 100%
27
26
26/27 (96.3%)
81.7 - 99.3%
Birleşik Kanıtlanmış ve
Olası Asperjiloz
58
57
57/58 (98.3%)
90.8 - 99.7%
19
C. Spesifite
İnvazif Aspergillosis’i negatif olan 110 tane akciğer nakli yapılmış hastadan alınan 305 BAL numunesi ve 57 katı organ transferi
yapılmış hastadan alınan toplam 98 numune ile spesifite çalışması yapılmıştır ve sonuçlar aşağıdaki tabloda gösterilmiştir.
Verilen sonuçlar mold kolonizasyonsuz ve mold kolonizasyon nakil yapılan numuner içindir.
Tablo 17
İnvazif Aspergillosis’i negatif Akciğer nakli yapılan ve katı organ tarnferi yapılan hastaların numunelerinin spesifitesi
Tanı
N
Kolonizasyonsuz kontroller
341
İndeks
< 0.5
330
Kolonizasyonlu kontroller
62
50
Kontrol Toplamı
403
380
Negatif (%)
330/341 (96.8%)
94.3 - 98.2%
50/62 (80.6%)
69.1 - 88.6%
380/403 (94.3%)
91.6 - 96.2%
SOT ve akciğer nakli alıcısı olup İnvaziv Asperjilozu bulunan hastalardan birlikte alınan BAL numunelerinin özgünlüğü, organ
nakli tipine göre aşağıdaki tablo 18'da verilmektedir.
Tablo 18
İnvazif Aspergillosis’i negatif Akciğer nakli yapılan ve katı organ tarnferi yapılan hastaların BAL sıvısı numunelerinin spesifitesi
Organ Nakli Tipi
N
İndeks
< 0.5
Negatif (%)
Kalp
28
25
25/28 (89.3%)
72.8 - 96.3%
Böbrek
25
22
22/25 (88.0%)
70.0 - 95.8%
Karaciğer
23
22
22/23 (95.7%)
79.0 - 99.2%
Akciğer
327
311
311/327 (95.1%)
92.2 - 97.0%
Kontrol Toplamı
403
380
380/403 (94.3%)
91.6 - 96.2%
İnvazif Aspergillosis’i negatif olan 41 tane hematolojik hastadan alınan 41 BAL numunesi ile spesifite çalışması yapılmıştır ve
sonuçlar aşağıdaki tabloda gösterilmiştir.
Tablo 19
İnvazif Aspergillosis’i negatif olan Hematolojik hastaların numunelerinin spesifitesi
N= 41
Tanı
N
Kontrol
41
İndeks
< 0.5
33
Negatif (%)
33/41 (80.5%)
66.0 – 89.8%
20
16-BIBLIOGRAPHY
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
17.
18.
19.
20.
21.
22.
23.
24.
25.
26.
Ansorg, R., R. Van Den Boom, and P.M. Rath. 1997. Detection of Aspergillus galactomannan antigen in foods and antibiotics.
Mycoses 40 : p. 353-7.
Ascioglu, S., J. H. Rex, B. De Pauw, J. E. Bennett, J. Bille, F. Crokaert, D. W. Denning, J. P. Donnelly, J. E. Edwards, Z.
Erjavec, D. Fiere, O. Lortholary, J. Maertens, J. F. Meis, T. F. Patterson, J. Ritter, D. Selleslag, P. M. Shah, D. A. Stevens and
T. J. Walsh. 2002. Defining opportunistic invasive fungal infections in immunocompromised patients with cancer and hematopoietic
stem cell transplants: an international consensus. Clin.Infect.Dis. 34 : p. 7-14.
Aubry, A., R. Porcher. J. Bottero, S. Touratier, T. Leblanc, B. Brethon, P. Rousselot, E. Raffoux, J. Menotti, F. Derouin, P.
Ribaud and A. Sulahian 2006. Occurrence and Kinetics of False-Positive Aspergillus GalactomannanTest Results following
Treatment with β-Lactam Antibiotics in Patients with Hematological Disorders. J. Clin. Microbiol. 44: p. 389-394.
Barnes P. D. and K. A. Marr. 2007 Risks, diagnosis and outcomes of invasive fungal infections in haemotopoeitic stem cell
transplant recipients. Brit. Journ. Haemotol. 139: p. 519-531.
Becker M. J., E. J. Lugtenburg. J. J. Cornelissen, C. V.D. Schee, H. C. Hoogsteden and S. D. Marie. 2003 Galactomannan
detection in computerized tomography-based broncho-alveolar lavage fluid and serum in haemotological patients at risk for invasive
pulmonary aspergillosis. Br. J. Haemotol. 121(3): p. 448-457.
Blijevens, N. M., J. P. Donelly, J. F. Meis, P. E. Verweij, and B. E. De Pauw. 2002 Aspergillus galactomannan antigen levels in
allogeneic haemotopoietic stem cell transplant receipients given total parenteral nutrition. Transpl. Infect. Dis. 4: p. 64-65.
Chambon-Pautas, C.,J. M. Costa, M.T. Chaumette, C. Cordonnier, and S. Bretagne. 2001 Galactomannan and polymerase
chain reaction for the diagnosis of primary digestive aspergillosis in a patient with acute myeloid leukaemia. J. Infect. 43: p. 213-214.
Clancy C., R. A. Jaber, H. L. Leather, J. R. Wingard, B. Staley, J. L. Wheat, C. Cline, K. H. Rand, D. Schain, M. Baz and M. H.
Nyugen. 2007 Bronchoalveolar Lavage Galactomannan in Diagnosis of Invasive Pulmonary Aspergillosis among Solid-Organ
Transplant Recipients. J. Clin. Microbiol. 45(6): p. 1759-1765.
de Repentigny, L., L. Kaufman, G. T. Cole, D. Kruse, J. P. Latge, and R. C. Matthews. 1994. Immunodiagnosis of Invasive
Fungal Infections. J Med Vet Mycol 32: p. 239-252.
Denning, D. W. 1998. Invasive Aspergillosis. Clin Infect.Dis. 26: p. 781-803.
Desai R, L.A. Ross and J. A. Hoffman Poster AAA 2008. The Role of Bronchoalveolar Lavage Galactomannan Assay in the
Diagnosis of Invasive Aspergillosis in Pediatric Populations.
Erjavec, Z. and P. E. Verweij. 2002. Recent progress in the diagnosis of fungal infections in the immunocompromised host. Drug
Resist. Updat. 5: p.3-10.
Gangneux, J., D. Lavarde, S. Bretagne, C. Guiguen and V. Gandemer. 2002. Transient aspergillus antigenaemia: think of milk.
Lancet. 359(9313):1251.
Hage,C. A., J. M. Reynolds, M. Durkin, L. J. Wheat, K. S. Knox. 2007. Plasmalyte as a Cause of false-positive results for
Aspergillus galactomannan in bronchoalveolar lavage fluid. J. Clin. Microbiol. 45: p. 676-677.
Herbrecht, R., V. Letscher-Bru, C. Oprea, B. Lioure, J. Waller, F. Campos, O. Villard, K. L. Liu, S. Natarajan-Ame, P. Lutz,
P.Dufour, J. P. Bergerat, and E. Candolfi. 2002. Aspergillus galactomannan detection in the diagnosis of Invasive Aspergillosis in
cancer patients. J Clin. Oncol. 20: p.1898-1906.
Herbrecht, R., D. Denning, T. Patterson, J. Bennett, R. Greene, J. Oestmann, W. Kern, K. Marr, P. Ribaud, O. Lortholary, R.
Sylvester,R. Rubin, J. Wingard, P. Stark, C. Durand, D. Caillot, E. Thiel, P. Chandrasekar, M. Hodges, H. Schlamm, P. Troke,
B. DePauw. 2002. Voriconazole Versus Amphotericin B for Primary Therapy of Invasive Aspergillosis. N Engl J Med. 347, 6: p. 408415.
Hussain S., D.L. Paterson, S. M. Studer, M. Crespo, J. Pilewski, M. Durkin, J.L. Wheat, B. Johnson, L. Mclaughlin, C.
Bentsen, K. McCurry and N. Singh. 2007 Aspergillus Galactomannan Antigen in the Bronchoalveolar Lavage Fluid for the
Diagnosis of Invasive Aspergillosis in Lung Transplant Recipients. Transplantation 83(10): p. 1330-1336.
Hussain S., C. J. Clancy, M.H. Nyugen, S. Swartzentruber, H. Leather, A. M. LeMonte, M.M. Durkin, K. S. Knox, C. A. Hage,
C. Bentsen, N. Singh, J.R. Wingard and L.J. Wheat. 2008 Performance Characteristics of the Platelia™ Aspergillus EIA for
detection of Aspergillus galactomannan antigen in bronchoalveolar lavage fluid. Clin. Vaccine Immunol.15(12) : p. 1760-1763.
Khan ZU, Ahmad S, and Theyyathel AM. 2008 Detection of Aspergillus fumigatus-specific DNA, (1-3)-beta-d-glucan and
galactomannan in serum and bronchoalveolar lavage specimens of experimentally infected rats. Mycoses; 51: p. 129-35.
Klont R.R., M.A.S.H. Mennink-Kersten and P. E. Verweij. 2004 Utility of Aspergillus Antigen Detection in Specimens Other than
Serum Specimens. Clin. Infect. Diseas. 39: p. 1467-74.
Knox KS, Rose AS, and Hage CA. 2007 Rapid Fungal Diagnosis: The Utility of Bronchoalveolar Lavage for Pneumocystis and
Endemic Mycoses. Current Fungal Infection Reports; 1: p. 153-8.
Kwak EJ and Nyugen MH. 2008 Galactomannan Detection in Bronchoalveolar Lavage Fluid. Current Fungal Infection Reports; 2:
p.206-213.
Latge, J. P. 1995. Tools and trends in the detection of Aspergillus fumigatus. Curr Top Med Mycol 6: p. 245-281.
Latge, J. P. 1999 Aspergillus fumigatus and Aspergillosis. Clin Microbiol Rev 12[2], 310-50.
Latge, J. P., H. Kobayashi, J. P. Debeaupuis, M. Diaquin, J. Sarfati, J. M. Wieruszeski, E. Parra, J. P. Bouchara, and B.
Fournet. 1994. Chemical and immunological characterization of the extracellular galactomannan of Aspergillus fumigatus.
Infect.Immun. 62: p. 5424-5433.
Letscher-Bru, V., A. Cavalier, E. Pernot-Marino, H. Koenig, D. Eyer, J. Waller amd E. Candolfi. 1998. Recherche d’antigene
galactomannane aspergilliare circulant par Platelia™ Aspergillus: antigenemies positives persistantes en l’absence d’infection. J.
Med. Mycol. 8:p. 112-113.
21
27. Maertens, J., J. Verhaegen, H. Demuynck, P. Brock, G. Verhoef, P. Vandenberghe, J. Van Eldere, L. Verbist, and M.
Boogaerts. 1999. Autopsy-controlled prospective evaluation of serial screening for circulating galactomannan by a sandwich
enzyme-linked immunosorbent assay for hematological patients at risk for invasive Aspergillosis. J.Clin. Microbiol. 37: p. 3223-3228.
28. Maertens, J., J. Verhaegen, K. Lagrou, J. Van Eldere, and M. Boogaerts. 2001. Screening for circulating galactomannan as a
noninvasive diagnostic tool for Invasive Aspergillosis in prolonged neutropenic patients and stem cell transplantation recipients: a
prospective validation. Blood 97: p. 1604-1610.
29. Maertens J., V. Maertens, K. Theunissen, W. Meersseman, P. Meersseman, S. Meers, E. Verbeken, G. Verhoef, J. V. Eldere
and K. Lagrou. 2009
a. Bronchoalveolar Lavage Fluid Galactomannan for the Diagnosis of Invasive Pulmonary
b. Aspergillosis in Patients with Hematologic Diseases. Clin. Infec. Diseas. 49: 1688-93.
30. Marr K. A., S. A. Balajee, L. McLaughlin, M. Tabouret, C. Bentsen and T.J. Walsh. 2004. Detection of Galactomannan
Antigenemia by Enzyme Immunoassay for the Diagnosis of Invasive Aspergillosis : Variables That Affect Performance. J. Infect. Dis.
190 :641-9
31. Marr K. A., M. Laverdiere, A. Gugel and W. Leisenring. 2005. Antifungal therapy decreases sensitivity of the Aspergillus
galactomannan enzyme immunoassay. Clin. Infect. Dis 40: p. 1762-9.
32. Mattei, D., D. Rapezzi, N. Mordini, F.Cuda, C. Lo Nigro, M. Musso, A. Arnelli, S. Cagnassi, and A. Gallamini. 2004. Falsepositive Aspergillus galactomannan enzyme-linked immunosorbent assay results in vivo during amoxicillin-clavulanic acid treatment.
J. Clin. Microbiol. 42: p. 5362-5363.
33. Mennink-Kersten M. A. S. H., D. Ruegebrink, R. Klont, A. Warris, H. J. M. Op den Camp and P. Verweij. 2005 Bifidobacterial
Lipoglycan as a New Cause for False-Positive Platelia Aspergillus Enzyme Immunoabsorbent Assay Reactivity. J. Clin. Microbiol.
43(8): 3925-3931.
34. Meersseman W., K. Lagrou, J. Maertens, A. Wilmer, G. Hermans, S. Vanderschueren, I. Spriet, E. Verbeken and E. V.
Wijngaerden. 2008 Galactomannan in Bronchoalveolar Lavage Fluid. Am. J. Respi. Crit. Care Med 177: p. 27-34.
35. Musher B., D. Fredericks, W. Leisenring, S. A. Balajee, C. Smith and K. Marr. 2004 Aspergillus Galactomannan Enzyme
Immunoassay and Quantitative PCR for Diagnosis of Invasive Aspergillosis with Bronchoalveolar Lavage Fluid. J. Clin. Microbiol.
42(12): p. 5517-5522.
36. Nareddy, S., P. H. Chandrasekar. 2008. False-positive Aspergillus galactomannan (GM) assay in histoplasmosis. J. Infection 56:
p. 80-81.
37. Nguyen MH, R. Jaber, H.L. Leather, J. R. Wingard, B. Staley, L. J. Wheat, C. L. Cline, M. Baz, K.H. Rand and C. J. Clancy.
2007 Use of bronchoalveolar lavage to detect galactomannan for diagnosis of pulmonary aspergillosis among
nonimmunocompromised hosts. J Clin Microbiol; 45:2787-92.
38. Patterson D. L. and N. Singh. 1999. Invasive Aspergillosis in Transplant Recipients. Medicine. 78(2) : p. 123-38.
39. Pauw B.D., Walsh T. J., Donelly J. P., Stevens D.A., Edwards J. E., Calandra T., Pappas P. G., Maertens J., Lortholary O.,
Kauffman C. A., Denning D.W., Patterson T.F., Maschmeyer G., Bille J., Dismukes W.E., Herbrecht R., Hope W. W., Kibbler
C.C., Kulberg B. J., Marr K. A., Munoz P., Odds F. C., Perfect J. R., Restrepo A., Ruhnke M., Segal M., Segal B. H., Sobel J. D.,
Sorell T.C., Viscoli C., Wingard J.R., Zaoutis T. and J.E. Bennett. 2008
a. Revised Definitions of Invasive Fungal Disease from the European Organization for Research and Treatment of Cancer/Invasive
Fungal Infections Cooperative Group and the National Institute of Allergy and Infectious Diseases Mycoses Study Group
(EORTC/MSG Consensu Group. Clin. Infectious Disease 46, p. 1813-1821.
40. Penack O., P. Rempf, B. Graf, I. W. Blau and E. Thiel. 2008 Aspergillus galactomannan testing in patients with long-term
neutropenia: implications for clinical management. Ann Oncol. 19(5): p. 984-9, Epub 2008.
41. Racil, Z., I. Kocmanova, M. Lengerova, J. Winterova, J. Mayer. 2007. Intravenous PLASMA-LYTE as a Major Cause of FalsePositive Results of Platelia™ Aspergillus Test for Galactomannan Detection in Serum. J. Clin. Microbiol. 45(2): p. 3141-3142.
42. Salonen J., O-P. Lehtonen, M-R Terasjarvi and J. Nikoskelainen. 2000. Aspergillus Antigen in Serum, Urine and
Bronchoalveolar Lavage Specimens of Neutropenic Patients in Relation to Clinical Outcome. Scand J. Infec. Dis. 32: p.485-490.
43. Sanguinetti M., B. Posteraro, L. Pagano, G. Pagliari, L. Fianchi, L. Mele, M. L. Sorda, A. Franco and G. Fadda.
2003.Comparison of Real-Time PCR, Conventional PCR, and Galactomannan Antigen Detection by Enzyme-Linked
Immunosorbent Assay using Bronchoalveolar Lavage Fluid Samples from Hematology Patients for Diagnosis of Invasive Pulmonary
Aspergillosis. J. Clin. Microbiol. 41(8): p.3922-3925.
44. Siemann M., M. Koch-Dorfler and M. Gaude 1998. False-positive results in premature infants with the Platelia Aspergillus
sandwich enzyme-linked immunoabsorbent assay. Mycoses. 41(9-10): 373-7.
45. Stynen, D., A. Goris, J. Sarfati, and J. P. Latge. 1995. A new sensitive sandwich enzyme-linked immunosorbent assay to detect
galactofuran in patients with Invasive Aspergillosis. J.Clin. Microbiol. 33: p. 497500.
46. Stynen, D., J. Sarfati, A. Goris, M. C. Prevost, M. Lesourd, H. Kamphuis, V. Darras, and J. P. Latge. 1992. Rat monoclonal
antibodies against Aspergillus galactomannan. Infect.Immun. 60: p. 2237-2245.
47. Sulahian, A., F. Boutboul, P. Ribaud, T. Leblanc, C. Lacroix, and F. Derouin. 2001. Value of antigen detection using an enzyme
immunoassay in the diagnosis and prediction of Invasive Aspergillosis in two adult and pediatric hematology units during a 4-year
prospective study. Cancer 91: p. 311-318.
48. Sulahian, A., M. Tabouret, P. Ribaud, J. Sarfati, E. Gluckman, J. P. Latge, and F. Derouin. 1996. Comparison of an enzyme
immunoassay and latex agglutination test for detection of galactomannan in the diagnosis of Invasive Aspergillosis. Eur.J Clin.
Microbiol. Infect. Dis. 15: p. 139145.
49. Surmont, I., W. Stockman. 2007. Gluconate-containing intravenous solutions: Another cause of false-positive galactomannan
assay reactivity. J. Clin. Microbiol. 45: p. 1373.
50. Swanink, C. M., J. F. Meis, A. J. Rijs, J. P. Donnelly, and P. E. Verweij. 1997. Specificity of a sandwich enzyme-linked
immunosorbent assay for detecting Aspergillus galactomannan. J Clin. Microbiol. 35: p. 257-260.
22
51. Upton A., A. Gugel, W. Leisenring, A. Limaye, B. Alexander, R. Hayden and K. Marr. 2005. Reproducibility of Low
Galactomannan Enzyme Immunoassay Index Values Tested in Multiple Laboratories. J. Clin. Microbiol, 43: p 4796-4800.
52. Verdaguer V., T. J. Walsh, W. Hope and K. Cortez. 2007 Galactomannan antigen detection in the diagnosis of invasive
aspergillosis. Expert Rev. Mol. Diagn. 7(1):p. 21-32.
53. Verweij, P. E., E. C. Dompeling, J. P. Donnelly, A. V. Schattenberg, and J. F. Meis. 1997. Serial monitoring of Aspergillus
antigen in the early diagnosis of Invasive Aspergillosis. Preliminary investigations with two examples. Infection 25: p. 86-89.
54. Verweij, P. E. and J. F. Meis. 2000. Microbiological diagnosis of Invasive Fungal Infections in transplant recipients.
Transpl.Infect.Dis. 2: p. 80-87.
55. Verweij, P. E., D. Stynen, A. J. Rijs, B. E. de Pauw, J. A. Hoogkamp -Korstanje, and J. F. Meis. 1995. Sandwich enzyme-linked
56.
57.
58.
59.
60.
61.
62.
immunosorbent assay compared with Pastorex latex agglutination test for diagnosing Invasive Aspergillosis in immunocompromised
patients. J. Clin. Microbiol. 33: p. 1912-1914.
Verweij, P. E., C. M. Weemaes, J. H. Curfs, S. Bretagne, J. F. Meis. 2000. Failure to detect circulating Aspergillus markers in a
patient with chronic granulomatous disease and Invasive Aspergillosis. J Clin. Microbiol. 38: p. 3900-3901.
Verweij P., J-P Latge, A. J. J. M. Rijs, W. J. G. Melchers, B. E. D. Pauw, J. A. A. Hoogkamp-Korstanje. 1995 Comparison of
Antigen Detection and PCR Assay Using Bronchoalvealor Lavage Fluid for Diagnosing Invasive Pulmonary Aspergillosis in Patients
Receiving Treatment for Hematological Malignancies. J. Clin. Microbiol. 33(12): p. 3150-3153.
Walsh T. J., R.L. Schaufele, T. Sein, J. Gea-Banacloche, M. Bishop, N. Young, R. Childs, J. Barrett, H. L. Malech, and S.M.
Holland. 2002. Reduced expression of galactomannan antigenemia in patients with Invasive Aspergillosis and chronic
granulomatous disease or Job’s syndrome. Abstracts of the 40th Annual Meeting of the Infectious Diseases Society of America.
Arlington, VA. P. 105 ; Abstr. 345.
Wheat, L. J., E. Hackett, M. Durkin, P. Connolly, R. Petraitiene, T. J. Walsh, K. Knox, C. Hage. 2007. Histoplasmosisassociated cross-reactivity in the Bio-Rad Platelia™ Aspergillus enzyme immunoassay. Clin. Vaccine Immunol. 14 (5): p. 638-40.
Wheat J.L., A. M. Monte, M.M. Durkin, S.L. Swartzentruber, K.K. Knox, C.A. Hage, C. Bentsen, S. Husain, N. Singh, C.J.
Clancy, M.H. Nyugen AAA2008 Poster Detection of Aspergillus galactomannan in BAL in the Platelia Aspergilllus EIA, as
performed at MiraVista Diagnostics. http://www.miravistalabs.com Site verified June 9, 2008.
Wheat J. and T.J. Walsh. 2008 Diagnosis of Invasive Aspergillosis by Galactomannan Antigenemia Detection using an enzyme
immunoassay. Eur J Clin Microbiol Infect Dis; 27:245-51.
Yeo, S. F. and B. Wong. 2002. Current Status of Nonculture Methods for Diagnosis of Invasive Fungal Infections.
Clin.Microbiol.Rev. 15: p. 465-484.
Distributed in the U.S. by :
Bio-Rad Laboratories
th
6565 185 Avenue NE
Redmond, WA 98052, U.S.A.
Manufactured in France by:
Bio-Rad
3, boulevard Raymond Poincaré
92430 Marnes-la-Coquette France
Tel. : +33 (0) 1 47 95 60 00
Fax : +33 (0) 1 47 41 91 33
www.bio-rad.com
03/2011
881051
For Customer Orders and Technical Service Call: 1-800-2-BIO-RAD (1-800-224-6723)
23

PLATELIA™ ASPERGILLUS Ag 62794 96 TEST - Bio-Rad

Transkript

Benzer belgeler

Fungal Pnömoniler Prof. Dr. Erhan Tabakoğlu

The proposal of double consistency ındex (pdc)

PDF - 1110 KB - İ.Ü. Cerrahpaşa Tıp Fakültesi

AO-NAO Endekslerinin Mevsimsel Tahmindeki Yeri ve

OLGU SUNUMU

PDF - 460 KB - İ.Ü. Cerrahpaşa Tıp Fakültesi

help user ınterface documentatıon