PreHandbook Template Word 2010

Transkript

Kasım 2013
RespiFinder® RG Panel El Kitabı
25
Versiyon 1
Kalitatif in vitro diagnostik
Rotor-Gene® Q aletleriyle kullanılmak üzere
4692163
PathoFinder B.V., Randwycksingel 45, 6229 EG Maastricht, THE
HOLLANDA
Distribütör: QIAGEN GmbH, QIAGEN Strasse 1, 40724 Hilden,
ALMANYA
R1
1075775TR
Sample & Assay Technologies
QIAGEN Sample and Assay Technologies
QIAGEN her biyolojik örneğin içeriğinin saptanması ve izolasyonunu mümkün
kılacak şekilde yenilikçi örnek ve test teknolojilerinin önde gelen sağlayıcısıdır.
Gelişmiş ve yüksek kalitede ürünlerimiz ve hizmetlerimiz örnekten sonuca kadar
başarıyı garanti eder.
QIAGEN şunlarda standartları belirler:

DNA, RNA ve protein saflaştırma

Nükleik asit ve protein testleri

microRNA araştırmaları ve RNAi

Test ve örnek teknolojilerinin otomasyonu
Misyonumuz olağanüstü başarılar elde etmenizi ve yeni buluşlar yapmanızı
sağlamaktır. Daha fazla bilgi için, www.qiagen.com adresini ziyiaret ediniz.
İçindekiler
Kullanım Amacı
4
Özet ve Açıklama
4
İşlemin Prensibi
4
Hedef genler
6
Sağlanan Materyal
Kit içeriği
Gereken ama Sağlanmayan Malzemeler
9
9
9
Uyarılar ve Önlemler
10
Genel önlemler
11
Reaktif Saklama ve Muamele
12
Örnek Kullanımı ve Saklama
12
İşlem
13
Nükleik asit ekstraksiyonu ve hazırlama
13
Bir negatif kontrol kullanma
13
Bir dahili kontrol ve taşıyıcı RNA kullanma
14
Protokol: PCR amplifikasyonu ve erime analizi
16
Sonuçların Yorumlanması
33
Normalizasyon
33
Analiz
33
Eşik
33
Sorun Giderme kılavuzu
34
Kalite Kontrol
37
Sınırlamalar
38
Performans Özellikleri
38
Referanslar
38
Semboller
38
İrtibat Bilgisi
39
Sipariş Bilgisi
40
RespiFinder RG Panel El Kitabı 11/2013
3
Kullanım Amacı
RespiFinder RG Panel insanlarda solunum yolu enfeksiyonlarına yol açabilen 16
RNA virüsü,* 2 DNA virüsü ve 3 bakteriyi saptamak ve ayırmak için bir kalitatif
multipleks PCR testidir: adenovirüs, bocavirüs, corona NL63, corona OC43,
corona 229E, corona HKU1, hMPV, influenza A, influenza B, influenza A
H1N1v, parainfluenza 1, parainfluenza 2, parainfluenza 3, parainfluenza 4,
rinovirüs/enterovirüs, RSV-A, RSV-B, Bordetella pertussis, Legionella
pneumophila ve Mycoplasma pneumoniae.
RespiFinder RG Panel diğer klinik ve laboratuvar bulgularıyla birlikte
kullanıldığında solunum yolu enfeksiyonunun tanısına yardımcı olur. Negatif
sonuçlar viral veya bakteriyel solunum yolu enfeksiyonu olmadığı anlamına
gelmez; negatif sonuçlar tanı, tedavi ve diğer ilgili kararlar için tek temel olarak
kullanılmamalıdır. Pozitif sonuçlar diğer patojenlerle ortak enfeksiyon olasılığını
ortadan kaldırmaz. Saptanan patojen(ler) hastalığın kesin nedeni olmayabilir.
Son tanı için diğer laboratuvar testleri ve klinik durumun değerlendirilmesi de
kullanılmalıdır. Ürün sadece laboratuvar uzmanları tarafından kullanım içindir.
Özet ve Açıklama
Akut solunum yolu enfeksiyonu, yetişkinler ve çocuklarda en sık görülen akut
enfeksiyon tipidir ve immünyetmezlikli hastalarda önemli bir hastalık nedenidir.
Solunum yolu enfeksiyonları sıklıkla üst solunum yolu enfeksiyonları (ÜSYE) ve
alt solunum yolu enfeksiyonları (ASYE) olarak ayrılır. ÜSYE, rinore, konjonktivit,
farenjit, otitis media ve sinüziti içerir. ASYE pnömoni, bronşiyolit ve bronşiti
içerir. Hem virüsler hem bakteriler akut SYE durumuna neden olabilir ve neden
olan ajanların hem sayısı çoktur hem de çok değişik ajanlar vardır ve böylece
tanı koymak açısından önemli zorluklara yol açarlar.
Nükleik asit amplifikasyon testlerinin tek başına veya çoklu formatta hızlı,
hassas ve spesifik alternatifler oldukları ispatlanmıştır. Çoklu (multipleks) testler
birden fazla hedefin birlikte amplifikasyonunu mümkün kılarak miks
enfeksiyonların önemi açısından ve solunum hastalığının prognozu ve nüks
durumu açısından bilgi verir.
İşlemin Prensibi
RespiFinder RG Panel tek bir gerçek zamanlı PCR reaksiyonunda 13 adede
kadar hedefin yüksek ölçüde ayrıntılı analizini mümkün kılan bir teknoloji olan
SmartFinder teknolojisini temel alır. RespiFinder RG Panel 21 farklı patojenin ve
ayrıca bir dahili kontrolün saptanmasını mümkün kılan floresan etiketli 12
SMART (gerçek zamanlı tek tüp multipleks amplifikasyon) probuyla birlikte çeşitli
MultiFinder prob setleri bulunur. Reaksiyon hedef (c)DNA'yı amplifiye etmek için
* RespiFinder RG Panel 16 virüsü saptar ama rinovirüsü enterovirüsten ayırmaz.
4
bir PCR adımıyla revers transkripsiyon adımını birleştiren bir ön amplifikasyonla
başlar. Bunun sonucunda ön amplifikasyon reaksiyonunun bir kısmı 2 PCR
tüpüne aktarılır. Bir prob hibridizasyonu adımı ve bir prob ligasyonu ve
amplifikasyonu adımından oluşan iki ayrı SmartFinder reaksiyonu yapılır.
Saptama, erime eğrisi analizi kullanılarak gerçekleştirilir. Tüm iş akışının
şematik bir temsili Şekil 1'de verilmiştir.
Şekil 1. RespiFinder RG Panel iş akışına genel bakış.
RespiFinder RG Panel patojen nükleik asitlerini saptamak için Rotor-Gene Q
MDx veya Rotor-Gene Q aletini kullanır.
5
Teste gerçek negatif örneklerle nükleik asit degredasyonu, PCR inhibisyonu veya
test başarısızlığı nedeniyle yalancı negatif örnekleri ayırmak üzere bir dahili
kontrol (IC) dahil edilmiştir.
Kullanılan örnek nazofaringeal sürüntülerden ekstraksiyonu ve saflaştırması
yapılmış total nükleik asitlerdir. Örneklerin hazırlanması panel kapsamında ayrı
bir süreçtir. Örnekleri kullanmak ve nükleik asitlerin ekstraksiyonunu ve
saflaştırmasını yapmak için uygun yöntemler veya ürünler kullanın (bakınız
“Örnek Kullanımı ve Saklama”, sayfa 12, ve “Nükleik asit ekstraksiyonu ve
hazırlama”, sayfa 13).
Hedef genler
Prob ve primer tasarımı için kullanılan hedef genler Tablo 1'de gösterilmektedir.
Tablo 1. RespiFinder RG Panel hedef genleri
Gen
Patojen
kodu
MS2 faj lizis proteini geni
IC
Adenovirüs
Hekson geni (H)
Adeno
Bocavirüs
Nonkapsid geni (NP1)
Boca
Corona 229E
Nükleokapsid protein geni (NP)
229E
Corona HKU1
Nükleokapsid fosfoprotein geni (N)
HKU1
Corona NL63
NL63
Corona OC43
OC43
hMPV
hMPV
İnfluenza A
Matriks protein geni (M1)
InfA
İnfluenza B
Matriks protein geni (M1)
InfB
İnfluenza A H1N1v
Nöraminidaz geni
H1N1
Parainflüenza 1
Hemaglutinin-nöraminidaz geni (HN)
PIV1
Parainflüenza 2
PIV2
Parainflüenza 3
PIV3
Hedef
Kontrol
Dahili kontrol (IC)
Virüsler
Tablo bir sonraki sayfada devam ediyor
6
Tablo 1. Devam
Gen
Patojen
kodu
Parainflüenza 4
Majör nükleokapsid protein geni (N)
PIV4
Rinovirüs/
Enterovirüs
5' çevrilmemiş bölge poliprotein geni
(PP)
Rino/
Entero
RSV-A
RSVA
RSV-B
RSVB
Bordetella pertussis
İnsersiyon dizisi 481 (IS481)
B. pert
Chlamydophila
pneumoniae*
Majör dış membran geni (OmpA)
C. pneu
Legionella
pneumophila
Makrofaj inhibitör potansiyatör geni
(Mip)
L. pneu
Mycoplasma
pneumoniae
Sitadhesin protein geni (P1)
M. pneu
Hedef
Virüsler (devam)
Bakteri
* Not: RespiFinder RG Panel Chlamydophila pneumoniae saptanması Sadece Araştırma
Kullanımı içindir. Diagnostik işlemlerde kullanım için değildir. Bir hastalığın tanısı, önlenmesi
veya tedavisi hakkında bilgi sağlamak açısından kullanılması için herhangi bir iddiada veya
temsilde bulunulmaz.
Her örnek için bir ön amplifikasyon ve 2 SmartFinder reaksiyonu yapılır.
Patojenler, etiketler ve 2 SmartFinder reaksiyonunda karşılık gelen SMART
hibridizasyon probları için belirtilen Tm Tablo 2'de gösterilmiştir.
7
Tablo 2. SMART problarının hedefleri ve karşılık gelen Tm değerleri
Etiket
Cy®5
ROX™
BHQ®1
SMART probu
Tm (°C)
kabul
edilebilir
aralık
Patojen
kodu
(karışım 1)
Patojen
kodu
(karışım 2)
Cy5 probu 1
50,5-53,5
L. pneu
OC43
Cy5 probu 2
54,5-57,5
B. pert
NL63
Cy5 probu 3
60,0-63,0
Rino/Entero
229E
Cy5 probu 4
66,0-69,0
C. pneu*
HKU1
Cy5 probu 5
70,5-73,5
M. pneu
–
Cy5 probu 6
76,5-79,5
–
H1N1
ROX probu 1
52,5-55,5
RSVA
PIV1
ROX probu 2
57,5-60,5
Adeno
PIV2
ROX probu 3
62,5-65,5
hMPV
PIV3
ROX probu 4
66,5-69,5
RSVB
PIV4
ROX probu 5
72,5-75,5
InfA
Boca
ROX probu 6
76,5-79,5
InfB
–
BHQ1 probu 1
70,5-73,5
IC
IC
8
Sağlanan Materyal
Kit içeriği
RespiFinder RG Panel
(25)
Katalog no.
4692163
Reaksiyon sayısı
İçindekiler
25
Kapak
rengi
Hacim
Pre-amplification Master Mix (Ön
amplifikasyon Ana Karışım)
Mor
180 µl
Internal Control (IC) (Dahili Kontrol)
Siyah
300 µl
Pre-amplification Primermix (Ön
amplifikasyon Primermix)
Beyaz
65 µl
Hybridization Buffer (Hibridizasyon
Tamponu)
Sarı
80 µl
Probemix 1
Kırmızı
40 µl
Probemix 2
Mavi
40 µl
TwoStep Buffer (İki Adımlı Tampon)
Yeşil
(amber
tüpte)
Ligase Enzyme (Ligaz Enzimi)
Kahverengi
50 µl
Taq Polymerase (Taq Polimeraz)
Turuncu
20 µl
Dilution Buffer (Dilüsyon Tamponu)
Saydam
1700 µl
RespiFinder RG Panel Handbook (English) (RespiFinder
RG Panel El Kitabı)
1600 µl
1
Gereken ama Sağlanmayan Malzemeler
Kimyasallarla çalışırken daima uygun bir laboratuvar önlüğü, tek kullanımlık
eldivenler ve koruyucu gözlükler kullanın. Daha fazla bilgi için, ürün
tedarikçisinden elde edilebilecek uygun güvenlik veri sayfalarına (SDS'ler)
başvurun.
9
Reaktifler

RNA/DNA ekstraksiyon kiti (bakınız “Nükleik asit ekstraksiyonu ve
hazırlama”, sayfa 13)

RNaz/DNaz içermeyen su
Sarf Malzemesi

Hidrofobik filtreler içeren tek kullanımlık uçlar

Hidrofobik filtreler içeren tek kullanımlık düşük retansiyon uçlar

RNaz/DNaz içermeyen 1,5 ml tüpler

RNaz/DNaz içermeyen 0,2 ml PCR tüpleri (kapaklı tek tüpler veya ayrı
kapaklı strip tüpler)

Strip Tüpler ve Kapaklar, 0,1 ml (kat. no. 981103 veya 981106) RotorGene Q aletleriyle kullanılmak üzere
Ekipman

Ayarlanabilir pipetler:* 0,1–2 µl, 2–20 µl, 20–200 µl

Çok kanallı ayarlanabilir pipet:* 1–10 µl (isteğe bağlı)

Vorteks karıştırıcı*

Tezgah santrifüjü* 2 ml tüpler için rotorlu

Santrifüj*, 0,2 ml reaksiyon tüpleri için

Soğutma bloğu veya buz

Termal döngüleyici* 0,2 ml PCR tüpleri için ısıtmalı kapaklı ve
1–5°C/saniye rampa hızlı (ön-amplifikasyon ve hibridizasyon için; örn.,
GeneAmp® PCR System 9700 blok tabanlı termal döngüleyici)

Rotor-Gene Q MDx 5plex HRM* veya Rotor-Gene Q 5plex HRM* aleti ve
aksesuarları
Uyarılar ve Önlemler
İn vitro diagnostik kullanım için
Kimyasallarla çalışırken daima uygun bir laboratuvar önlüğü, tek kullanımlık
eldivenler ve koruyucu gözlükler kullanın. Daha fazla bilgi için, lütfen uygun
güvenlik veri sayfalarına (SDS'ler) başvurun. Bunlar çevrim içi olarak PDF
halinde www.qiagen.com/safety adresinde yer almaktadır ve kullanıcılar
burada her QIAGEN kiti ve kit bileşeni için SDS'yi bulabilir, okuyabilir ve
yazdırabilir.
* Aletleri üreticinin önerilerine göre kontrol edildi
10
ği ve kalibre edildiğinden emin olun
Kullanılan saflaştırma kiti için güvenlik bilgisi açısından ilgili kit el kitabına
bakınız. Aletlerle ilgili güvenlik bilgisi açısından ilgili alet kullanıcı el kitabına
bakınız.
Örnek ve test atığını yerel güvenlik düzenlemelerinize uygun olarak atın.
24 saat acil bilgisi
Kimyasal acil veya kaza yardımı aşağıdan günün 24 saati alınabilir:
CHEMTREC
ABD ve Kanada dışında  Tel: +1-703-527-3887 (ödemeli aramalar kabul
edilir)
Genel önlemler
Daima şunlara dikkat edin:

Bu moleküler test sadece vasıflı laboratuvar personelince yapılmalıdır.

Pozitif materyalleri (örnekler ve pozitif kontroller) tüm diğer reaktiflerden
ayrı saklayın ve ekstrakte edin ve bunları reaksiyon karışımına konumsal
açıdan ayrılmış bir yerde ekleyin.

Testi yaparken tek kullanımlık eldivenler giyin.

Çapraz kontaminasyonu önlemek için hidrofobik filtreler içeren tek
kullanımlık uçlar kullanın.

RT-PCR enzim karışımı, ligaz enzimi ve Taq polimerazı kullanırken
hidrofobik filtreler içeren tek kullanımlık düşük retansiyon uçlar kullanın.

Rnaz/DNaz içermeyen PCR flakonları kullanın.

RNA/DNA örneklerini daima buz üstünde çözün ve bunları buz üstünde
veya bir soğutma bloğunda tutun.

Enzimleri buzluktan çıkardıktan sonra daima buzda veya bir soğutma
bloğu içinde tutun. Enzimlere dikkatli davranın ve çok yavaş karıştırın.

Çözüldüğünde reaktifleri bir santrifüjde 5 saniye santrifüje edin ve hafifçe
yukarı ve aşağı pipetleyerek karıştırın.

Tüm döngüleme programları Rotor-Gene Q yazılımına test yapılmadan
önce girilmelidir.

PCR flakonları ve plakları daima kısa süre santrifüje edin ve aerosollerden
kaçınmak için dikkatli açın.
Not: Kontaminasyonu önlemek için deneysel aktiviteleri PCR kabinlerinde şu 3
ayrı alan şeklinde yapmanızı kuvvetle öneririz:
Alan 1: Ön amplifikasyon, hibridizasyon ve ligasyon/çözünme analizi için ana
karışımlar hazırlayın.
11
Alan 2: Karışıma RNA/DNA örneği ekleyin.
Alan 3: Ön amplifikasyon, hibridizasyon ve erime eğrisi analizini 3 adımda
yapın:

Ön amplifikasyonu yapın.

Ön amplifikasyon ürünlerini hibridizasyon karışımına ekleyin (tercihen
bir PCR kabini içinde) ve hibridizasyon yapın.

TwoStep karışımına hibridizasyon ürünlerini ekleyin (tercihen PCR
kabininde) ve ligasyon, amplifikasyon ve erime eğrisi analizini yapın.
Reaktif Saklama ve Muamele
RespiFinder RG Panel bileşenleri –15 ila –30°C'de saklanmalıdır ve
etikette belirtilen son kullanma tarihine kadar stabildir. Tekrarlanan dondurma
çözmeden (>5 x) kaçınılmalıdır çünkü test performansını azaltabilir.
Örnek Kullanımı ve Saklama
Solunum patojeni saptanması yüksek kalitede örneklerin toplanması,
laboratuvara hızla taşınmaları ve laboratuvar testinden önce uygun saklamaya
dayanır. Nazofaringeal sürüntüler solunum yolunun viral ve/veya bakteriyel
enfeksiyonlarının saptanması için uygundur.
Klinik örnekler laboratuvara mümkün olduğunca hızlı şekilde taşınmalı,
bölüntülere ayrılmalı ve işlenmelidir Örnekler 4°C'de tutulmalıdır. Eğer örnekler
48 saat içinde işlenemeyecekse dondurulmaları ve/veya
–20°C altında, tercihen –70°C'de tutulmaları gerekir.
12
İşlem
Nükleik asit ekstraksiyonu ve hazırlama
Tablo 3'te gösterilen QIAGEN'den QIAamp® MinElute® Virus Spin Kiti RespiFind
RG Panel kullanım için belirtilen insan örneği tipinden DNA ve RNA saflaştırma
için doğrulanmıştır. Nükleik asit saflaştırmayı kit el kitabındaki talimata göre
yapın.
Tablo 3. RespiFinder RG Panel kullanılmak üzere doğrulanmış
saflaştırma kiti
Örnek tipi
Nükleik asit izolasyon kiti
Nazofaringeal
sürüntüler
QIAamp MinElute Virus Spin Kit (50)
Katalog
numarası
(QIAGEN)
57704
200 µl örnek materyali kullanın ve 60 µl elüsyon tamponunda elüsyon yapın.
Nükleik asitleri konsantre etmeye kalkışmamanızı kuvvetle öneririz çünkü bu
durum RT-PCR enzimlerinin inhibisyon riskini arttırabilir. Lizis yapılmış örneğe
bir dahili kontrol eklenir (bakınız “Bir dahili kontrol ve taşıyıcı RNA kullanma”,
sayfa 14).
QIAamp MinElute Virus Spin Kitini kullanırken lizis tamponunu örneğe bir
laminar hava akışı kabininde eklemenizi öneririz. Örnek lizis yapıldıktan sonra
ekstraksiyon işlemine tezgahta devam edilebilir. Kullandıktan sonra laminar
hava akışı kabinini bir dekontaminasyon solüsyonu (örn., 1000 ppm çamaşır
suyu)* ve UV ışığını 30 dakika çalıştırarak dekontamine etmek önerilir.
Ekstraksiyonu yapılmış DNA/RNA'da dondurma-çözme döngülerinden mümkün
olduğunca kaçının ve bir gün içinde işlenecekse nükleik asit ekstrelerini 4°C'de
saklayın. Daha uzun dönemler için ekstraksiyonu yapılmış RNA/DNA'yı –20°C
veya –70°C'de saklayın.
Bir negatif kontrol kullanma
Her çalışmada bir negatif kontrol olmalıdır. Bir negatif kontrol 200 µl
PCR sınıfı su artı dahili kontrolden (IC) oluşur. Bu negatif kontrol nükleik asit
* Kimyasallarla çal
,ışırken
tek kullanımlık
daima uygun
eldivenler
bir laboratuvar
ve koruyucu
önlüğü
gözlükler kullanın. Daha fazla bilgi için, ürün tedarikçisinden elde edilebilecek uygun güvenlik veri
sayfalar
ına (SDS'ler) başvurun.
13
ekstraksiyonu işlemi dahil olmak üzere normal bir örnek muamelesi görür. Son
analizde negatif kontrol FAM/ROX ve FAM/Cy5 kanallarında arka alan sinyali
ve Green kanalında pozitif IC sinyali için bir referans görevi görür.
Bir dahili kontrol ve taşıyıcı RNA kullanma
QIAamp MinElute Virus Spin Kitinin RespiFinder RG Panel kombinasyon halinde
kullanılması örnek hazırlama ve aşağı doğru test etkinliğini izlemek için
saflaştırma işlemine bir dahili kontrol (IC) konmasını gerektirir. Ayrıca QIAamp
MinElute Virus Spin Kiti taşıyıcı RNA hazırlanmasını gerektirir.
IC bir MS2 fajıdır ve lizis RNA/DNA ekstraksiyonu ve RespiFinder RG Panel test
performansı için ve olası PCR inhibisyonunun kontrolü için bir kontrol olarak
sağlanır. IC, taşıyıcı RNA ile birlikte örneğin eklenmesinden önce lizis
tamponuna eklenir. Eklenen IC miktarı örneğin başlangıç hacminden
bağımsızdır.
Eklenen IC miktarı elüsyon hacmine bağlıdır. QIAamp MinElute Virus Spin Kitini
kullanıldığında ekstraksiyonu yapılmış RNA/DNA elüsyonu 60 µl içinde
yapılacaktır. AL tamponuna eklenecek IC hacmi örnek başına 5,5 µl'dir (bakınız
Tablo 4).
Kuvvetli bir enfeksiyon ve/veya çoklu enfeksiyon durumunda IC erime tepesi son
analizde görülmeyebilir. Bunun nedeni yüksek miktarda patojenik nükleik asidin
testteki reaktiflerin çoğunu tüketmesidir. Bunun sonucunda IC sinyali bir
enfeksiyon belirten bir veya daha fazla spesifik çözünme tepesi varlığında yoksa
test halen geçerlidir.
14
Tablo 4. Gereken AL Tamponu, taşıyıcı RNA–AVE Tamponu karışımı ve
IC hacmi
Örnek sayısı
AL Tamponu
Hacmi (ml)
Taşıyıcı RNA–
AVE hacmi (µl)
Dahili kontrol
hacmi (µl)
1
0,22
6,2
2
0,44
12,3
11
3
0,66
18,5
16,5
4
0,88
24,6
22
5
1,1
30,8
27,5
6
1,32
36,9
33
7
1,54
43,1
38,5
8
1,76
49,2
44
9
1,98
55,4
49,5
10
2,2
61,5
55
11
2,42
67,7
60,5
12
2,64
73,8
66
5,5
15
Protokol: PCR amplifikasyonu ve erime analizi
Başlamadan önce yapılacaklar

Şablon RNA/DNA'yı (donmuşsa) ve tüm reaktifleri çözün ve tüpleri buz
üstünde tutun.

Pipetleme kayıplarını dengelemek üzere çeşitli karışımların gereken
miktarlarından biraz daha fazlasını hazırlayın.
İşlem
Ön amplifikasyon
1. Ön amplifikasyon ana karışımını ana karışımın tam olarak
çözünmesi ve homojenizasyonunu sağlamak üzere ters çevirin. Tüpü
kısa süre santrifüje edin. Ön amplifikasyon reaksiyon karışımını
Tablo 5 uyarınca hazırlayın ve buz üstünde tutun.
Reaksiyon karışımı tipik olarak örnek dışında PCR için gerekli tüm
bileşenleri içerir.
Not: Hibridizasyon karışımları (adım 6) ve TwoStep karışımı (adım 12) ön
amplifikasyon karışımıyla aynı anda hazırlanabilir ve kullanılıncaya kadar
karanlıkta 4°C sıcaklıkta saklanmalıdır. Tüm 3 karışımın aynı anda
hazırlanması ancak tüm protokol gecikme olmaksızın izlendiğinde
yapılabilir; farklı adımlar arasında duraklamaya izin verilmez. Daha uzun
süre saklama (gece boyunca gibi) sonrasında karışımların stabilitesi garanti
edilmez.
Tablo 5. Ön amplifikasyon reaksiyon karışımının hazırlanması
Örnek sayısı
(reaktif tüpünün kapak rengi)
1
12
Seyreltme tamponu (saydam)
6,25 µl
75 µl
Ön amplifikasyon ana karışımı (mor)
6,25 µl
75 µl
Ön amplifikasyon primer karışımı
(beyaz)
2,5 µl
30 µl
Toplam hacim
15 µl
180 µl
2. Ön amplifikasyon reaksiyon karışımını hafifçe ama iyice karıştırın ve
karışımdan 15 µl miktarını her 0,2 ml PCR tüpüne pipetleyin. Sonra
elüsyon yapılmış örnek DNA/RNA'sı veya negatif kontrolden 10 µl
ekleyin (bakınız Tablo 6).
16
3. PCR tüplerini kapatın. İyice karıştırın. Tüpleri kısa süre santrifüjleyin
ve tüp tipleri tekrar buza veya bir soğutma bloğuna koyun.
Tablo 6. Ön amplifikasyon reaksiyonlarının hazırlanması
Örnek sayısı
1
12
Ön amplifikasyon reaksiyon
karışımı
15 µl
her birinden 15 µl
Örnek veya negatif kontrol
10 µl
her birinden 10 µl
Toplam hacim
25 µl
her birinden 25 µl
4. Blok tabanlı termal döngüleyiciyi Tablo 7'ye göre programlayın.
Tablo 7. Ön amplifikasyon için termal döngüleyici programı
Ters transkripsiyon:
20 dakika
Başlangıç aktivasyon
adımı:
2 dakika
50°C
95°C
3 adımlı döngüleme:
Denatürasyon
25 saniye
94°C
Birleştirme
25 saniye
55°C
Uzatma
40 saniye
72°C
Döngü sayısı
40
Tut:
–
20°C
5. Ön amplifikasyon programını PCR tüpleri halen buzdayken başlatın.
Termal döngüleyicinin 50°C'ye ulaşmasını bekleyin. Sonra tüpleri
termal döngüleyici bloğuna koyun ve ısıtmalı kapağı kapatın.
Hibridizasyon
6. Hibridizasyon karışımı 1'i Tablo 8'e ve hibridizasyon karışımı 2'yi
Tablo 9'a göre hazırlayın ve yavaşça ama iyice karıştırın.
17
Hibridizasyon karışımları adım 1 içinde zaten hazırlanmışsa ön
amplifikasyon programının tamamlanmasını bekleyin ve sonra 7 ile devam
edin.
Tablo 8. Hibridizasyon karışımı 1 hazırlanması
Örnek sayısı
1
12
Hibridizasyon tamponu (sarı)
1,5 µl
18 µl
Prob karışımı 1 (kırmızı)
1,5 µl
18 µl
3,0 µl
36 µl
Hibridizasyon karışımı 1 toplam
hacmi
6,0 µl
72 µl
Tablo 9. Hibridizasyon karışımı 2 hazırlanması
Örnek sayısı
1
12
Hibridizasyon tamponu (sarı)
1,5 µl
18 µl
Prob karışımı 2 (mavi)
1,5 µl
18 µl
3,0 µl
36 µl
Hibridizasyon karışımı 2 toplam
hacmi
6,0 µl
72 µl
7. Her örnek için hibridizasyon karışımı 1'den 6 µl miktarını yeni bir
PCR tüpüne pipetleyin ve hibridizasyon karışımı 2'den 6 µl miktarını
yeni bir PCR tüpüne pipetleyin.
8. Ön amplifikasyon programı bittikten sonra (adım 5), PCR tüplerini
termal döngüleyiciden çıkarın ve kısa süre santrifüjleyin. 2 tüpten
her birine her ön-amplifikasyon reaksiyonundan 2 µl pipetleyin —
birinde hibridizasyon karışımı 1 ve birinde hibridizasyon karışımı 2
vardır (bakınız Tablo 10).
18
Tablo 10. Hibridizasyon reaksiyonlarının hazırlanması
Örnek sayısı
1
12
Hibridizasyon karışımı 1 (adım 7)
6,0 µl
her birinden
6,0 µl
Ön amplifikasyon reaksiyonu (adım
8)
2,0 µl
her birinden
2,0 µl
Toplam hacim
8,0 µl
her birinden
8,0 µl
Hibridizasyon karışımı 2 (adım 7)
6,0 µl
her birinden
6,0 µl
Ön amplifikasyon reaksiyonu (adım
8)
2,0 µl
her birinden
2,0 µl
Toplam hacim
8,0 µl
her birinden
8,0 µl
9. PCR tüplerini kapatın ve kısa süre santrifüje edin.
10. Blok tabanlı termal döngüleyiciyi Tablo 11'ye göre programlayın.
Tablo 11. Hibridizasyon için termal döngüleyici programı
Denatürasyon:
10 dakika
98°C
Probların hibridizasyonu:
30 dakika
60°C
Tut:
–
60°C
11. Ön amplifikasyon reaksiyonunun karışımları ve hibridizasyon
karışımlarını içeren tüpleri termal döngüleyici bloğuna yerleştirin ve
ısıtmalı kapağı kapatın. Hibridizasyon programını başlatın.
Ligasyon ve PCR
12. TwoStep karışımını Tablo 12 uyarınca hazırlayın. Yavaşça ama iyice
karıştırın ve kullanıncaya kadar buzda tutun.
Not: Örnekler 2 kısma bölündüğünden (hibridizasyon karışımı 1 ve
hibridizasyon karışımı 2) TwoStep karışımı iki kat olarak hazırlanmalıdır.
Her iki hibridizasyon karışımının her biri için 32,0 µl TwoStep gerekir.
19
TwoStep karışımı adım 1 içinde zaten hazırlanmışsa adım 13 ile devam
edin.
Tablo 12. TwoStep karışımı hazırlama
Örnek sayısı
(reaktif tüpünün kapak
rengi)
1*
2x1
2 x 12
TwoStep tamponu (yeşil)
30,6 µl
61,2 µl
734,4 µl
Ligaz enzimi (kahverengi)
1,0 µl
2,0 µl
24,0 µl
Taq polimeraz (turuncu)
0,4 µl
0,8 µl
9,6 µl
32,0 µl
64,0 µl
768,0 µl
Toplam hacim
* Not: 1x TwoStep karışımı hazırlamak asla gerekmez çünkü her örnek için TwoStep
karışımından 2 x 1 hacim hazırlanmalıdır.
13. Rotor-Gene Q aleti için aşağıdaki adımlara göre bir sıcaklık profili
oluşturun. Tablo 13, sayfa 21 içinde termal döngüleyici programına
bir genel bakış sağlanmıştır.
Genel test parametrelerini kurma
Şekil 2, 3
Yeni kanallar oluşturma
Şekil 4-7
Yükseltmeyi düzenleme
Şekil 8, 9
Sıcaklık profilini programlama
Şekil 10-16
Erime programını programlama
Şekil 17, 18
Özet ve şablonu kaydetme
Şekil 19, 20
Çalışmayı başlatma
Şekil 21
Tüm spesifikasyonlar Rotor-Gene Q yazılım versiyonu 2.1.0 ile ilgilidir.
Rotor-Gene aletlerini programlamak ile ilgili ek bilgiyi alet kullanıcı el
kitabında bulabilirsiniz. Şekillerde bu ayarlar kalın siyah çerçeveyle
gösterilmiştir. Rotor-Gene Q aletleri için şekiller dahil edilmiştir.
20
Tablo 13. TwoStep döngüleme için termal döngüleyici programına
genel bakış
Notlar
Probların bağlanması:
15 dakika
54°C
Başlangıç
denatürasyon adımı:
2 dakika
95°C
PCR 1: 3 adımlı
döngüleme:
Yüksek
özgüllüklü PCR
Denatürasyon
15 saniye
94°C
Birleştirme
15 saniye
60°C
Uzatma
15 saniye
72°C
Döngü sayısı
10
PCR 2: 3 adımlı
döngüleme:
Denatürasyon
15 saniye
94°C
Birleştirme
15 saniye
50°C
Denatürasyon
15 saniye
72°C
Döngü sayısı
23
Denatürasyon:
2 dakika
95°C
Erime programı:
–
45-85°C
Alma*
Alma†
* Alan kanallar: Yeşil, yükseltme 4; Kırmızı, yükseltme 1; FAM™/ROX, yükseltme 8 ve
FAM/Cy5, yükseltme 10.
†
Alan kanallar: Yeşil, Kırmızı, FAM/ROX ve FAM/Cy5. “Optimize gain before melt on all
tubes” (Tüm tüplerde erime öncesinde yükseltmeyi optimize et) kullanın. “The gain
giving the highest fluorescence less than 95 will be selected” (95 altında en yüksek
floresansı veren yükseltme seçilecektir).
21
14. Önce “New Run Wizard” (Yeni Çalışma Sihirbazı) diyalog kutusunu
açın (Şekil 2). “Locking Ring Attached” (Kilitleme Halkası
Tutturulmuş) kutusunu seçin ve “Next” (Sonraki) kısmına tıklayın.
1
2
Şekil 2. “New Run Wizard” diyalog kutusu.
15. Reaksiyon hacmi için 40 seçin ve “Next” kısmına tıklayın (Şekil 3).
1
2
Şekil 3. Genel test parametrelerini kurma.
22
16. Sonraki “New Run Wizard” diyalog kutusunda “Create New” (Yeni
Oluştur) düğmesine tıklayın (Şekil 4) ve Şekil 5–7'de gösterildiği gibi
2 ek kanal programlayın.
1
Şekil 4. Yeni kanallar oluşturun.
1
2
Şekil 5. Yeni kanal “FAM/ROX” oluşturun.
23
1
2
Şekil 6. Yeni kanal “FAM/Cy5” oluşturun.
1
2
Şekil 7. Yeni kanallar dahil edilmiştir.
17. Her kanal için yükseltmeyi Şekil 8'de belirtildiği şekilde düzenleyin.
Her kanal için son yükseltme ayarları Şekil 9'da belirtilmiştir.
Rotor-Gene Q aleti için yükseltme ayarları saptama kanallarında
satürasyonu önleyecek şekilde seçilir. Ancak saptama kanallarından
herhangi birinde satürasyon gözlenirse bu satüre olmuş kanal için
yükseltme ayarları uyarlanmalı ve yeni bir erime eğrisi analizi yapılmalıdır.
24
1
2
Şekil 8. Yükseltmeyi düzenleme. Örnek olarak şekil Cycling Green kanalı için
yükseltmeyi 4'e ayarlamayı göstermektedir.
1
Şekil 9. Tüm kanallar için son yükseltme ayarları. Gerekli kanallar şunlardır: Yeşil,
yükseltme 4; Kırmızı, yükseltme 1; FAM/ROX, yükseltme 8 ve FAM/Cy5, yükseltme 10.
25
18. Sonraki “New Run Wizard” diyalog kutusunda “Edit Profil” (Profil
Düzenle) düğmesine tıklayın (Şekil 10) ve sıcaklık profilini Şekil 1113'de gösterildiği gibi programlayın.
1
Şekil 10. Profili düzenleme.
1
2
3
Şekil 11. Probların bağlanması.
26
1
2
3
Şekil 12. Başlangıç denatürasyon adımı.
1
2
5a
4
5
6
3
Şekil 13. Bağlanmış probların amplifikasyonu.
27
1
2
4a
4
5
3
6
Şekil 14. 50°C'de sinyal alma dahil bağlanmış probların amplifikasyonu. Alma için
gerekli kanallar Şekil 15'te gösterilmiştir.
1
2
Şekil 15. Alma için gerekli tüm kanalların seçilmesi.
28
1
2
3
Şekil 16. PCR ürünleri ve problarının denatürasyonu.
1
2
3
Şekil 17. Erime programı.
29
1
2
Şekil 18. Erime programı sırasında alma.
1
Şekil 19. Sıcaklık profilinin özeti.
30
19. Şablonu daha sonra kullanma için kaydedin (Şekil 20).
1
Şekil 20. Şablonu daha sonra kullanma için kaydedin
20. TwoStep karışımının (adım 12 kısmından) oda sıcaklığına (15–25°C)
dengelenmesini bekleyin ve Rotor-Gene Q aletinin her Strip Tüpü
içine TwoStep karışımından 32,0 µl pipetleyin.
Not: Her örnek için 2 yeni tüpün her birine 32,0 µl TwoStep karışımı
pipetleyin.
21. Her hibridizasyon reaksiyonunu (8 µl) TwoStep karışımı içeren Strip
Tüplerine pipetleyin.
Son hacim örnek başına 40 µl verir.
Not: Hibridizasyon reaksiyonlarını TwoStep karışımına ekleninceye kadar
60°C'de tutun.
22. Strip Tüplerini uygun kapaklarla kapatın ve hemen Rotor-Gene Q
aleti rotoruna yerleştirin.
23. Rotoru Rotor-Gene Q aletine yerleştirin. Kilitleme halkasını
(Rotor-Gene Q aleti aksesuarı) tüplerin çalışma sırasında yanlışlıkla
aşınmasını önlemek üzere en üste yerleştirildiğinden emin olun.
31
24. Çalışmayı (Şekil 21) kaydedilen şablonu kullanarak (adım 19)
başlatın.
1
Şekil 21. Çalışmayı başlatma.
32
Sonuçların Yorumlanması
Normalizasyon
Rotor-Gene Q aletlerinde FAM/Cy5 kanalı için ham veriler farklı kanallar
arasında çapraz geçişi dengelemek üzere önce normalize edilmelidir.
Cy5 sinyallerinin normalizasyonu için ham kanal Erime FAM/Cy5 (filtre ayarları
470–660 nm) açın. “Option” (Seçenek) düğmesine basın ve “Normalise to Melt
FAM/ROX” (FAM/ROX Erime için normalize et) seçin. Yeni oluşturulmuş
Melt FAM/Cy5/Melt FAM/ROX ham veri dosyasının kırmızı kanal için ek
olarak normalize edilmesi gerekir (filtre ayarları 625/660 nm). Bu yeni Melt
FAM/Cy5/Melt FAM/ROX, ham veri dosyası açılıp “Option” düğmesine
tıklanması ve “Normalise to Melt Red” (Kırmızı Erime için Normalize Et) seçilerek
yapılır. Bu normalizasyonla Cy5 sıcaklık bağımlı floresansı düzeltilir ve daha
simetrik bir erime tepesiyle sonuçlanır.
Analiz
Ham veri dosyasını analiz etmek için “Analysis” (Analiz) penceresini açın ve
FAM/Cy5 için uygun normalize ham veri dosyasını “Melt” (Erime) sekmesi
altında seçin. Green (Yeşil) kanaldaki sinyaller (IC) (filtre ayarları 470–510 nm)
ve FAM/ROX kanalındaki sinyallerin (filtre ayarları 470–610 nm) normalize
edilmesi gerekmez FAM/ROX ve Green kanalları içinde karşılık gelen ham veri
dosyaları seçilir. SMART problarının farklı erime sıcaklıkları Tablo 14 sayfa 34
içinde gösterilmiştir.
Eşik
Tablo 13 (sayfa 21) ve Şekil 17 (sayfa 29) içinde tanımlandığı şekilde TwoStep
reaksiyonunun erime programında Rotor-Gene Q yazılımı yükseltme
optimizasyonu kullanılarak örnek sonuçlarını analiz etmek için erime eğrisi
analiz plotlarında şu eşik değerleri ayarlanmalıdır.

FAM/ROX kanalı: Eşik = 1

FAM/Cy5 kanalı (normalize): Eşik = 0

Green kanal (IC): dF/dT işaretini çevirin ve her iki karışımla FAM/ROX ve
FAM/Cy5 kanallarında pozitif erime tepesi göstermeyen tüm örnekleri
seçin. Eşiği bu negatif örneklerle elde edilen 50°C'de en yüksek floresans
seviyesine manuel olarak ayarlayın. Dahili kontrolün (70,5–73,5°C) kabul
edilebilir Tm aralığı dahilinde her iki karışımla erime tepeleri gösteren
örneklere artık gerçek negatif örnekler denebilir. Tek pozitif dahili kontrol
sonucu gösteren veya hiç göstermeyen örnekler geçersiz kabul edilmelidir.
Geçersiz örnekler tekrarlanmalıdır.
33
Tablo 14. SMART problarının hedefleri ve karşılık gelen Tm değerleri
Etiket
Cy5
ROX
BHQ1
SMART probu
Tm (°C)
kabul
edilebilir
aralık
Patojen
kodu
(karışım 1)
Patojen
kodu
(karışım 2)
Cy5 probu 1
50,5-53,5
L. pneu
OC43
Cy5 probu 2
54,5-57,5
B. pert
NL63
Cy5 probu 3
60,0-63,0
Rino/Entero
229E
Cy5 probu 4
66,0-69,0
C. pneu*
HKU1
Cy5 probu 5
70,5-73,5
M. pneu
–
Cy5 probu 6
76,5-79,5
–
H1N1
ROX probu 1
52,5-55,5
RSVA
PIV1
ROX probu 2
57,5-60,5
Adeno
PIV2
ROX probu 3
62,5-65,5
hMPV
PIV3
ROX probu 4
66,5-69,5
RSVB
PIV4
ROX probu 5
72,5-75,5
InfA
Boca
ROX probu 6
76,5-79,5
InfB
–
BHQ1 probu 1
70,5-73,5
IC
IC
Sorun Giderme kılavuzu
Bu sorun giderme kılavuzu çıkabilecek herhangi bir problemi çözmekte faydalı
olabilir. Daha fazla bilgi için Teknik Destek Merkezimizde Sık Sorulan Sorular
sayfasına da bakınız: www.qiagen.com/FAQ/FAQList.aspx. QIAGEN Teknik
Servisindeki bilim insanları bu el kitabındaki bilgi ve protokollerle ya da örnek
ve test teknolojileriyle ilgili herhangi bir sorunuzu cevaplandırmaktan daima
mutlu olacaktır (irtibat bilgileri için arka kapağa bakınız veya www.qiagen.com
adresini ziyaret ediniz).
34
Açıklama ve öneriler
Görünür spesifik erime tepesi yok ve IC erime tepesi yok
a) Termal döngüleme
programında
programlama
hatası/hataları
Termal döngüleyiciyi “Protokol: PCR
amplifikasyonu ve erime analizi”, sayfa 16
uyarınca programlayın ve testi tekrarlayın.
b) Pipetleme hatası veya
eksik reaktif.
RespiFinder testini “Protokol: PCR amplifikasyonu
ve erime analizi”, sayfa 16 izleyerek tekrarlayın.
c) IC eklenmemiş veya IC
örneğe lizis tamponu
eklenmesinden önce
eklenmiş
IC ve taşıyıcı RNA'yı lizis tamponuna kullanılan
ekstraksiyon protokolüne bakılmaksızın tercihen
örneğe eklendikten sonra eklemek önemlidir
(bakınız “Bir dahili kontrol ve taşıyıcı RNA
kullanma”, sayfa 14). Aksi halde IC, örnekteki
nükleazlar nedeniyle bozulabilir. Nükleik asit
ekstraksiyonu ve RespiFinder testini tekrarlayın.
d) Örnekte PCR
inhibitörleri var
Testi izole RNA/DNA'nın beş kat dilüsyonunu
kullanarak tekrarlayın.
Patojene spesifik erime tepeleri varlığında IC erime tepesi yok
Kuvvetli enfeksiyon
ve/veya çoklu
enfeksiyon
IC test içinde rekabet nedeniyle elenmiş. Sonuç
halen geçerli.
Yanlış erime tepeleri görünüyor
Çapraz kontaminasyon
Çapraz kontaminasyonu önlemek için reaksiyon
adımlarının ayrı odalarda yapıldığından emin
olun.
RespiFinder testini tekrarlayın.
Döngüleme programını kontrol edin ve tüm
muamele adımlarının “Protokol: PCR
amplifikasyonu ve erime analizi”, sayfa 16 içinde
tanımlandığı şekilde yapıldığından emin olun.
Protokolde belirtilen yerlerde buz üzerinde
çalıştığınızdan emin olun.
35
Açıklama ve öneriler
Örnek reaksiyonunda spesifik bir amplifikasyon olmadığında artmış
arka alan floresans sinyalleri görülebilir.
a) Örnek nükleik asit
ekstresinde bulunan
inhibe edici faktörler
etkin ve spesifik
amplifikasyonu
önlüyor.
Artmış arka alan sinyalleri RespiFinder RG Panel
eşik değerleri üzerinde olabilir ama nonspesifik
erime tepeleri olarak kolayca tanınır.
b) Negatif örneklerde
dahili kontrol
olmaması
Artmış arka alan sinyalleri RespiFinder RG Panel
eşik değerleri üzerinde olabilir ama nonspesifik
erime tepeleri olarak kolayca tanınır.
Artmış arka alana bir örnek Şekil 22 sayfa 37
içinde verilmiştir.
Artmış arka alana bir örnek Şekil 22 sayfa 37
içinde verilmiştir.
36
FAM/ROX kanalı
Karışım 1
Karışım 2
Negatif kontrol
Negatif kontrol
Gerçek pozitif
IC yok
IC yok
FAM/Cy5 kanalı
Karışım 1
Karışım 2
Gerçek
f
Negatif kontrol
IC yok
IC yok
Negatif kontrol
Green kanal (IC)
Karışım 1
Karışım 2
Negatif kontrol
IC yok
IC yok
Negatif kontrol
Şekil 22. Artmış arka alan örneği. Negative control (Negatif kontrol): Çizgiler negatif
kontrolle uyumludur ve FAM/ROX ve FAM/Cy5 kanallarında sinyal göstermez ama Green
kanalda (IC) spesifik bir dahili kontrol tepesi gösterir. True positive (Gerçek pozitif):
FAM/ROX karışım 1 ve FAM/Cy5 karışım 2 için belirtilen çizgiler gerçek pozitif erime tepeleri
gösteren örneklere karşılık gelir. No IC (IC yok): Çizgiler dahili kontrolün eklenmemiş olduğu
bir örneğe karşılık gelir. Bu örnekte spesifik bir amplifikasyon olmamış ve sonuçta FAM/ROX
kanalı için artmış arka alan floresansı olmuştur ve açık erime tepeleri göstermez ama eşik
değerinin üzerinde floresans seviyeleri gösterir.
Kalite Kontrol
RespiFinder RG Panel Hollanda'da Maastricht'de PathoFinder BV tarafından
ISO13485:2003 ve EN ISO 13485:2012 akreditasyonunu kalite sistemlerine
göre üretilmiştir.
37
Sınırlamalar
RespiFinder RG Panel diğer klinik ve laboratuvar bulgularıyla birlikte
kullanıldığında solunum yolu enfeksiyonunun tanısına yardımcı olur. Negatif
sonuçlar viral veya bakteriyel solunum yolu enfeksiyonunun bulunmadığına
işaret etmez. Negatif sonuçlar tanı, terapi veya diğer tedavi kararları için tek
temel olarak kullanılmamalıdır. Pozitif sonuçlar diğer patojenlerle ortak
enfeksiyon olasılığını ortadan kaldırmaz. Saptanan patojen(ler) hastalığın kesin
nedeni olmayabilir.
Son tanı için diğer laboratuvar testleri ve klinik durumun değerlendirilmesi de
kullanılmalıdır. Performans özellikleri QCMD'den doğrulanmış EQA panelleriyle
belirlenmiştir.
Ürün sadece laboratuvar uzmanları tarafından kullanım içindir.
RespiFinder RG Panel Chlamydophila pneumoniae saptanması Sadece
Araştırma Kullanımı içindir. Diagnostik işlemlerde kullanım için değildir. Bir
hastalığın tanısı, önlenmesi veya tedavisi hakkında bilgi sağlamak açısından
kullanılması için herhangi bir iddiada veya temsilde bulunulmaz.
Performans Özellikleri
RepliFinder RG Panel performans özellikleri için
bakınızwww.qiagen.com/p/RepliFinder-RG-Panel-CE.
Referanslar
QIAGEN, QIAGEN ürünlerini kullanan bilimsel yayınların büyük ve güncel bir
çevrimiçi veri tabanını tutmaktadır. Kapsamlı araştırma seçenekleri gereksinim
duyduğunuz makaleleri basit bir anahtar kelime arama veya uygulama,
araştırma alanı, başlık, vs. belirterek bulmanızı mümkün kılar.
Referans listesi için www.qiagen.com/RefDB/search.asp adresindeki çevrim içi
QIAGEN Referans Veri Tabanını ziyaret edin veya QIAGEN Teknik Servis ya da
yerel distribütörünüzle irtibat kurun.
Semboller
Ambalaj veya etikette şu semboller belirebilir:
<N>
<N> reaksiyon için yeterli reaktif içermektedir
Son kullanma tarihi
38
İn vitro diagnostik tıbbi cihaz
Katalog numarası
Lot numarası
Materyal sayısı
Sıcaklık sınırlaması
Üretici
Kullanma talimatına başvurun
Dikkat
İrtibat Bilgisi
Teknik yardım ve daha fazla bilgi için lütfen www.qiagen.com/Support
adresindeki Teknik Destek Merkezimize gidin veya 00800-22-44-6000
numarasını arayın veya QIAGEN Teknik Servis Bölümlerinden ya da yerel
distribütörlerden birini arayın (arka kapağa bakın veya www.qiagen.com
adresini ziyaret edin).
39
Sipariş Bilgisi
Ürün
İçindekiler
Kat. no.
RespiFinder RG Panel
(25) CE
25 reaksiyon için: Ön amplifikasyon
Ana Karışımı, Dahili Kontrol, Ön
amplifikasyon Primermix, Probemixes,
Ligase Enzyme, Taq Polymerase ve
Tamponlar
4692163
QIAamp MinElute Virus Spin Kit — RespiFinder RG Panel
kullanılmak üzere nazofaringeal sürüntülerden viral DNA
ve RNA'nın eş zamanlı saflaştırılması için
QIAamp MinElute Virus
Spin Kit (50)
50 miniprep için: 50 QIAamp
MinElute Sütunu, QIAGEN Proteaz,
taşıyıcı RNA, tamponlar, Toplama
Tüpleri (2 ml)
57704
Rotor-Gene Q MDx — klinik uygulamalarda in vitro
diagnostik olarak doğrulanmış gerçek zamanlı PCR analizi
için
Rotor-Gene Q MDx
5plex HRM Platform
5 kanal artı HRM kanallı (yeşil, sarı,
turuncu, kırmızı, kızıl) gerçek zamanlı
PCR döngüleyici ve yüksek
çözünürlüklü eritme analizörü dizüstü
bilgisayar, yazılım, aksesuarlar
parçalar ve işçilik için 1 yıllık garanti
dahildir kurulum ve eğitim dahil
değildir
9002032
Rotor-Gene Q MDx
5plex HRM System
değildir
9002033
40
Ürün
İçindekiler
Kat. no.
Rotor-Gene Q — gerçek zamanlı PCR'de olağanüstü
performans için
Rotor-Gene Q 5plex
HRM Platform
değildir
9001580
Rotor-Gene Q 5plex
HRM System
değildir
9001650
Rotor-Gene Q aksesuarları
Strip Tubes and Caps,
0.1 ml (250)
10–50 µl 1000 reaksiyon için 4 tüp ve
kapaklı 250 strip
981103
Strip Tubes and Caps,
0.1 ml (2500)
10–50 µl'lik 10.000 reaksiyon için 4 tüp
ve kapaklı 10 x 250 strip
981106
Güncel lisanslama bilgisi ve ürüne spesifik red beyanları için ilgili QIAGEN kiti
el kitabı veya kullanıcı el kitabına bakınız. QIAGEN kit el kitapları ve kullanıcı el
kitapları www.qiagen.com adresinde bulunabilir veya QIAGEN Teknik Servis
veya yerel distribütörünüzden istenebilir.
41
Ticari markalar: QIAGEN®, QIAamp®, MinElute®, Rotor-Gene® (QIAGEN Group); BHQ® (Biosearch Technologies, Inc.); Cy® (GE Healthcare);
FAM™, GeneAmp®, ROX™ (Life Technologies Corporation); RespiFinder® (PathoFinder BV).
RespiFinder RG Panel için Sınırlı Lisans Sözleşmesi
Bu ürünün kullanılması ürünün herhangi bir satın alanı veya kullanıcısının şu şartları kabul ettiğini belirtir:
1.
Ürün sadece ürünle birlikte ve bu el kitabında sağlanan protokollerle uyumlu olarak ve panel içindeki bileşenlerle kullanım için kullanılabilir.
QIAGEN ürünle sağlanan protokoller, bu el kitabı ve www.qiagen.com adresinde bulunan ek protokollerde tanımlananlar dışında bu kite dahil
edilmemiş herhangi bir bileşen ile kitin içindeki bileşenleri kullanma veya birleştirme açısından herhangi bir fikri mülkiyet altında bir lisans
vermez. Bu ek protokollerden bazıları QIAGEN kullanıcıları tarafından QIAGEN kullanıcıları için sağlanmıştır. Bu protokoller QIAGEN
tarafından iyice test edilmiş veya optimize edilmiş olmayabilir. QIAGEN üçüncü tarafların haklarını ihlal etmediklerini garanti etmez ve beyan
etmez.
2.
Açık olarak belirtilen lisanslar dışında QIAGEN bu kitin ve/veya kullanımının/kullanımlarının üçüncü tarafların haklarını ihlal etmediği
konusunda garanti vermez.
3.
Bu panel ve bileşenleri tek kullanım için lisanslanmıştır ve tekrar kullanılamaz, yenilenemez veya tekrar satılamaz.
4.
QIAGEN açık olarak belirtilenler dışında açık veya zımni herhangi bir başka lisansı özellikle reddeder.
5.
Panelin satın alıcısı ve kullanıcısı yukarıda yasaklanan herhangi bir eyleme neden olabilecek veya bunları kolaylaştırabilecek herhangi bir adım
atmamayı veya başkasının atmasına izin vermemeyi kabul eder. QIAGEN bu Sınırlı Lisans Sözleşmesinin yasaklarını herhangi bir mahkemede
yürürlüğe koyabilir ve kit ve/veya bileşenleriyle ilişkili herhangi bir fikri mülkiyet hakkı veya bu Sınırlı Lisans Sözleşmesini yürürlüğe koymak için
tüm araştırma ve mahkeme masraflarını avukat masrafları dahil olmak üzere geri alacaktır.
Güncellenmiş lisans şartları için bakınız www.qiagen.com.
Satın alana not
Bu ürün Hollanda'da Maastricht'de PathoFinder BV tarafından ISO13485:2003 akreditasyonlu kalite sistemlerine göre üretilmiş bir RespiFinder
ürünüdür. Bu ürünler sadece son kullanıcı tarafından kullanım için satılır ve tekrar satılamaz, dağıtılamaz veya tekrar paketlenemez.
© 2013 QIAGEN, tüm hakları saklıdır.
www.qiagen.com
Australia  [email protected]
Austria  [email protected]
Belgium  [email protected]
Brazil  [email protected]
Canada  [email protected]
China  [email protected]
Denmark  [email protected]
Finland  [email protected]
France  [email protected]
Germany  [email protected]
Hong Kong  [email protected]
India  [email protected]
Ireland  [email protected]
Italy  [email protected]
Japan  [email protected]
Korea (South)  [email protected]
Luxembourg  [email protected]
Mexico  [email protected]
The Netherlands  [email protected]
Norway  [email protected]
Singapore  [email protected]
Sweden  [email protected]
Switzerland  [email protected]
UK  [email protected]
1075775TR
145021934
Sample & Assay Technologies

PreHandbook Template Word 2010

Transkript

Benzer belgeler

Important Note Template Word 2010

Analiz Yazılımı Hızlı Başvuru Kılavuzu

panset altıgen masa

CONTI-SCALE X_Prospect_TR_EWS_03-2016

iX Developer Panel Yazılımı

Metal Çatı Sistemi

QuantiFERON Kontrol Paneli Prospektüsü

POLARIS Touch Panel 12.1"

QuantiFERON Control Panel

Protokol: Genel Saflaştırma Protokolü

E-Katalog

Gömme Rezervuar Broşürü

Bolum 11 Roundup Ready? Soya`nin Es Zamanli - EU

ipsogen® BCR-ABL1 mbcr Kit Handbook