72556-72558 hcv ultra (883607) turc - Bio-Rad

72556-72558 hcv ultra (883607) turc - Bio-Rad

MonolisaTM HCV Ag-Ab ULTRA
1 plaka - 96 test
5 plaka - 480 test
72556
72558
HCV ENFEKİSYONUNU İNSAN SERUMU VEYA PLAZMASINDA
İMMÜNO ENZİMATİK TEKNİKLE ALGILAMA KİTİ
İmalatçı kalite kontrolü
Bio-Rad şirketi tarafından imal edilen ve pazarlanan tüm ürünler, hammaddelerin teslim
alınmasından nihai ürünlerin pazarlanmasına kadar bir kalite güvence sistemi kontrolündedir.
Her nihai ürün partisi kalite kontrole tabi tutulur ve ancak kabul kriterlerine uyduğu takdirde
pazarlanır.
Her partinin üretim ve kontrol dokümantasyonu şirketimiz tarafından muhafaza edilir.
İÇİNDEKİLER
1-
DOZAJIN AMACI
2-
TEST PRENSİBİ
3-
KİTİN İÇİNDEKİLER
4-
GEREKLİ OLAN ANCAK ÜRÜNLE BİRLİKTE VERİLMEYEN MALZEMELER
5-
HİJYEN VE GÜVENLİK TALİMATLARI
6-
ÖNLEMLER
7-
NUMUNELER
8-
REAKTİFLERİN YENİDEN OLUŞTURULMASI- SON KULLANIM TARİHİ SAKLAMA
9-
ÇALIŞMA ŞARTLARI
10 - SİSTEM ADAPTASYONU
11 - HESAPLAMALAR VE SONUÇLARIN DEĞERLENDİRİLMESİ
12 - NUMUNE VE KONJUGAT İLAVELERİNİN SPEKTROFOTOMETRİK YÖNTEMLE
KONTROL EDİLMESİ
13 - TESTİN PERFORMANSI
14 - TEST LİMİTLERİ
15 - KAYNAKÇA
2
1 - DOZAJIN AMACI
TM
Monolisa HCV Ag-Ab ULTRA insan serumu veya plazmasında hepatit C virüs enfeksonu ile ilintili
antikorların ve kapsid antijeninin algılanmasına dayanan, HCV enfeksiyonunun ortaya çıkarılmasına
yönelik immünoenzimatik bir testtir.
2 - TEST PRENSİBİ
Mikroplaka aşağıdaki malzemeler ile duyarlılaştırılmıştır:
∑ Hepatit C kapsidine yönelik monoklonal bir antikor.
∑ NS3 bölgesine tekabül eden 2 rekombinant protein: Genotip 1 ve 3a.
∑ NS4 bölgesine tekabül eden bir rekombinant protein.
∑ Hepatit C kapsid bölgesine tekabül eden mutasyona uğramış bir peptid.
∑ Kullanılan konjugatlar şunlardır:
∑ Konjugat 1 (R6): Hepatit C kapsidine yönelik monoklonal biyotinli bir murin antikoru. Bu monoklonal
antikor solid fazda kullanılan mutasyonlu kapsid peptidine karşı reaksiyon göstermez.
∑ Konjugat 2 (R7): Konjugat 2, peroksidaz ile işaretlenmiş insan anti-IgG murin antikorları ile
peroksidaz ile işaretlenmiş streptavidinden oluşan bir karışımdır
Testin uygulanması aşağıdaki reaksiyonel aşamaları içerir:
1) Konjugat 1, ardından incelemeye tabi tutulacak numuneler ve kontrol serumları mikroplaka
haznelerine dağıtılır. Anti-HCV antikorları var ise, solid faza sabitlenen antijenlere bağlanır. Hepatit
C kapsid antijenleri mevcut ise, bu antijenler solid faz monoklonal antikorları ve konjugat 1 biyotinli
monoklonal antikorları tarafından bağlanır.
2) 37°C sıcaklıkta 90 dakikalık bir inkübasyon ve bir yıkama aşamasından sonra, peroksidaz ile
işaretlenmiş insan anti-IgG antikorları ve peroksidaz ile işaretlenmiş streptavidin içeren konjugat 2
mikroplakanın her haznesine ilave edilir. Solid faz ile reaksiyona giren insan IgG'leri bulunması
durumunda, insan anti-IgG konjugatı insan antikorlarına bağlanır. Numunede hepatit C virüsü
kapsid antijeni bulunması durumunda, peroksidaz /streptavidin konjugatı konjugat 1'deki biyotine
sabitlenir.
3) 37°C sıcaklıkta 30 dakikalık bir inkübasyon ve bağlı olmayan enzimatik konjugatların yıkama yoluyla
atılmasından sonra, antijen-antikor-peroksidaz kompleksleri substrat ilave edilerek ortaya çıkarılır.
4) Laboratuar sıcaklığında gerçekleşen 30 dakikalık inkübasyon ve reaksiyonun durmasından sonra,
okuma spektrofotometre ile 450/620-700 nm'de yapılır. Bir numune için ölçülen absorbans teste tabi
tutulan numunede anti-HCV antikoru ve/veya hepatit C kapsid antijeni bulunup bulunmadığının
belirlenmesini sağlar. Renk yoğunluğu solid faza bağlanmış anti-HCV antikoru ve/veya hepatit C
kapsid antijeni miktarı ile oranıtlıdır.
3
3 - KİTİN İÇİNDEKİLER
ETİKETLEME
Sunum
REAKTİFLERİN NİTELİĞİ
1 plaka
5 plaka
1
5
1 şişe
70 ml
1 şişe
235 ml
1 şişe
1 ml
1 şişe
1 ml
1 şişe
1,5 ml
1 şişe
3 ml
MİKROPLAKA
R1
R2
R3
Bir HCV anti-kapsid monoklonal antikoru ve saflaştırılmış
rekombinant antijenler (NS3, NS4) ve HCV kapsid bölgesinin
mutasyonlu bir peptidi ile duyarlılaştırılmış 12 şerit
KONSANTRE YIKAMA SOLÜSYONU (20X)
NaCl pH 7,4 Tris Tamponu
TM
Koruyucu: Proclin 300 (%0,04)
NEGATİF KONTROL
SAB içeren HCl Tris Tamponu;
TM
Koruyucu: Proclin 300 (%0,1)
POZİTİF KONTROL
R4
R5a
R5b
Anti-HCV antikorları içeren, HBs antijeni ve anti-HIV1 ve antiHIV2 antikorları açısından negatif, fotokimyasal olarak etkisiz
hale getirilmiş S.A.B. içeren bir HCL Tris tamponunda
sulandırılmış insan serumu
TM
Koruyucu: Proclin 300 (%0,1)
POZİTİF ANTİJEN KONTROLÜ
Liyofilize bir kapsid peptidi içeren sentetik kontrol pozitif
antijeni
ANTİJEN KONTROL SULANDIRICISI
1 şişe
1 şişe
yeterli
yeterli
miktar 1 ml miktar 1 ml
1 şişe
1 ml
1 şişe
1 ml
murin
1 şişe
15 ml
2 şişe
2 x 30 ml
Peroksidaz ile işaretlenmiş insan anti-IgG murin antikorları ve
peroksidaz ile işaretlemiş streptavidin Yeşile boyanmıştır.
TM
Koruyucu: Proclin 300 (%0,5)
1 şişe
15 ml
2 şişe
2 x 30 ml
1 şişe
60 ml
2 şişe
2 x 60 ml
1 şişe
5 ml
2 şişe
2 x 5 ml
1 şişe
28 ml
3 şişe
3 x 28 ml
R5a sulandırıcısı. Bir koruyucu içeren su: Proclin
(% 0,5)
TM
300
KONJUGAT 1
R6
HCV kapsidine yönelik, biyotin ile işaretlenmiş
monoklonal antikoru. Menekşe rengine boyanmıştır.
Koruyucu: Sodyum azid (<%0,1), Cosmocil %0,025
KONJUGAT 2
R7
R8
R9
R10
4
PEROKSİDAZ SUBSTRAT TAMPONU
% 0,015 H2O2 ve % 4 dimetilsülfoksit (DMSO) içeren sitrik asit
ve sodyum asetat pH 4,0 solüsyonu
KROMOJEN
Tetrametil benzidin (TMB) içeren solüsyon
DURDURMA SOLÜSYONU
1 N sülfürik asit solüsyonu
4 - GEREKLİ OLAN ANCAK ÜRÜNLE BİRLİKTE VERİLMEYEN MALZEMELER
∑
∑
∑
∑
∑
∑
∑
∑
∑
∑
∑
∑
∑
Damıtık veya tamamen demineralize su.
Çamaşır suyu ve sodyum bikarbonat.
Emici kâğıt.
Tek kullanımlık eldivenler.
Koruyucu gözlükler.
Tek kullanımlık tüpler.
50 µl, 80 µl, 100 µl, 200 µl ve 1 ml'lik hacimler dağıtabilen ayarlanabilir veya sabit, otomatik veya
yarı otomatik pipetler
10 ml, 200 ml ve 1.000 ml dereceli deney tüpleri.
Vorteks tipi çalkalayıcı.
Mikroplakalar için otomatik*, yarı otomatik* veya manüel yıkama sistemi
37°C ± 1°C* termostatlı ben mari veya kuru inkübatör*
Kontamine atık konteyneri
(490, 620, 450/620-700 nm filtrelerle donatılmış) mikroplaka okuma cihazı*.
(*) Teknik servislerimiz tarafından onaylanan cihazlar konusunda tam bilgi edinmek için bize danışınız.
5 - HİJYEN VE GÜVENLİK TALİMATLARI
Kitteki tüm reaktifler "in vitro" teþhis amacıyla kullanılmaya yöneliktir ve profosyonel kullanım içindir.
Bu test kiti sadece, laboratuvar prosedürlerini ve potansiyel tehlikelerini bilen, eğitimli ve kalifiye
personel tarafından kullanılmalıdır. Uygun koruyucu giysiler; laboratuvar önlüğü, göz ve yüz koruma
için gözlük, tek kullanımlık eldiven ( sentetik, lateks olmayan eldivenler önerilir) kullanılmalıdır ve
reaktifler ve hasta numunelerini kullanmak iyi bir laboratuvar pratiği gerektirir. Testi çalıştıktan sonra
eller iyice yıkanmalı.
∑ Ağzınızla pipetlemeyin.
∑ Pozitif kontrol R4 fotokimyasal yöntemlerle etkisiz hale getirilmiştir.
∑ Pozitif kontrolün hazırlanmasında kullanılan insan kaynaklı malzeme (R4) teste tabi tutulmuş ve
hepatit B virüsü yüzey antijeni (Ag HBs) ve insan immünyetmezlik virüsüne yönelik antikorlar (antiHIV-1 ve anti-HIV-2) açısından reaktif bulunmamıştır. Bilinen hiçbir test yöntemi bulaşıcı ajan
bulunmadığını kesin bir şekilde garanti edemediği için, reaktifleri ve hastalardan alınan tüm
numuneleri bulaştırma potansiyeli olan maddeler addederek alışıldık önlemler ile kullanın.
∑ Numuneler ve insan kaynaklı reaktifler ile doğrudan temas eden malzemeyi ve ayrıca yıkama
solüsyonlarını kontamine ürünler addedin.
∑ Numunelerin veya bunları içeren solüsyonların sıçramasına engel olun.
∑ Kirlenen yüzeyler % 10 sulandırılmış çamaşır suyu ile temizlenecektir. Bulaşan sıvı bir asit ise,
kirlenen yüzeyler önceden sodyum bikarbonat ile nötrleştirilecek, ardından çamaşır suyu ile
temizlenecek ve emici kâğıt ile kurutulacaktır. Temizleme işleminde kullanılan malzeme kontamine
atıklar için öngörülmüş özel bir konteynere atılmalıdır.
∑ İnsan kaynaklı numunler ve reaktifler ve kontamine malzeme ve ürünler, bulaşıcı özellikleri
giderildikten sonra atılacaktır
− Bu işlem ya % 5 sodyum hipoklorit son konsantrasyonlu çamaşır suyuna 30 dakika boyunca
batırılarak,
− Ya da minimum 2 saat boyunca 121 °C'de otoklavlama vasıtasıyla gerçekleştirilir.
DİKKAT: Sodyum hipoklorit içeren solüsyonları otoklavın içine sokmayın.
∑ Substrat tamponunun, kromojenin ve durdurma solüsyonunun cilt ve mukozalar ile hiçbir şekilde
temas etmesine izin vermeyin. Güvenlik veri fişleri talep üzerine verilmektedir.
∑ Solüsyonları veya yıkama atık sıvılarını veya biyolojik numuneler içeren herhangi bir sıvıyı lavaboya
atmadan önce, nötrleştirmeyi ve/veya otoklavlamayı unutmayın.
∑ Bazı reaktifler sodyum azid içerir. Bu bileşik kurşun veya bakır kanalizasyonlar ile birlikte son derece
patlayıcı özelliklere haiz metal azotürler oluşturabilir.
∑ Bu tür azotürlerin kanalizasyonlarda birikmesine engel olmak için, bu reaktifleri lavaboya atarken
nötrleştirin ve lavaboyu bol miktarda su ile yıkayın.
TM
∑ Bazı reaktifler ProClin 300 (% 0,04, % 0,1 ve/veya % 0,5) içerir
∑
∑
Xi: TAHRİŞ EDİCİ MADDE
R43: Cilt ile temas etmesi halinde duyarlılaşmaya yol açabilir
S28-37: Cildinizle temas ettikten sonra, derhal su ve sabun ile bol bol yıkanın. Uygun eldivenler
takın.
Güvenlik verileri fişi talep üzerine verilmektedir.
5
6 - ÖNLEMLER
Elde edilecek sonuçların kalitesi aşağıdaki laboratuar uygulamalarına tam olarak uyulmasına bağlıdır:
∑ Son kullanma tarihi geçen reaktifleri kullanmayın.
∑ Aynı deney sırasında farklı partilere ait reaktifleri birbirine karıştırmayın.
∑ Test ismi ve test özel tanıtım numarası her mikroplaka çerçevesinin üzerinde belirtilmiştir. Bu özel
TM
tanıtım numarası her şeridin üzerinde de yer alır. Monolisa
HCV Ag-Ab ULTRA: Özel
Tanıtım Numarası = 55
∑
∑
∑
∑
∑
∑
∑
∑
∑
∑
Bu tanıtım numarası her kullanımdan önce kontrol edilmelidir. Test numarası bulunmayan veya
gerçekleştirilen testin numarasından farklı olan hiçbir şerit, kullanılmamalıdır. NOT: Aynı deney
boyunca hep aynı partiyi kullanmak kaydıyla, kitte teslim edilenlerden farklı yıkama solüsyonu
(etiketin üzerindeki yeşil 20X ibaresi ile tanıtılan, R2), substrat tamponu (mavi TMB buf. ibaresi ile
tanıtılan, R8), kromojen (menekşe rengi TMB 11X. ibaresi ile tanıtılan, R9) ve durdurma solüsyonu
(kırmızı 1N ibaresi ile tanıtılan, R10) partileri kullanmak mümkündür. Bu reaktifler şirketimizin diğer
ürünleri ile birlikte kullanılabilir. Ayrıca, belli bir deneyde bir tek karışımın kullanılması kaydıyla,
yıkama solüsyonu (etiketin üzerindeki yeşil 20X ibaresi ile tanıtılan, R2) düzgün bir şekilde yeniden
oluşturulan farklı Bio-Rad reaktif kitlerine dahil edilmiş diğer iki yıkama solüsyonundan biri ile
(etiketin üzerindeki mavi bir 10X veya turuncu bir 10X ibaresi ile tanıtılan, R2) karıştırılabilir. Ayrıntılı
bilgi edinmek için teknik servislerimizle irtibat kurunuz.
Reaktiflerin ortam sıcaklığında dengelenmesi için, kullanımdan önce 30 dakika bekleyin.
Her türlü kontaminasyonu önleyerek, reaktifleri özenle tekrar oluşturun
Konjugatların enzimatik faaliyetini bozabilecek reaktif buharlar (asitler, alkaliler, aldehitler) veya
tozlar mevcut iken test yapmayın.
Damıtık su ile mükemmel bir şekilde yıkanmış cam aletler veya tercihen tek kullanımlık donanım
kullanın.
Yıkama işleminin sonu ile reaktiflerin dağıtımı arasında geçen sürede mikroplakanın kurumasına
izin vermeyin.
Enzimatik reaksiyon tüm metallere veya metal iyonlarına karşı çok duyarlıdır. Dolayısıyla, hiçbir
metal unsur, konjugatı veya substrat solüsyonunu içeren farklı solüsyonlar ile temas etmemelidir.
Developman solüsyonu (substrat tamponu+ kromojen) pembe renkte olmalıdır. Yeniden oluşturma
işlemini izleyen dakikalarda, başka bir rengin ortaya çıkması reaktifin kullanılamaz durumda
olduğunu ve değiştirilmesi gerektiğini gösterir
Bu preparat için tercihen, tek kullanımlık kaplar ve plastik dağıtım malzemeleri veya önceden 1 N
hidroklorik asit, ardından damıtık su ile yıkanmış ve kurutulmuş cam kaplar kullanın. Bu solüsyonu
güneş ışınlarına maruz bırakmayın.
Her serum için yeni bir dağıtım konisi kullanın.
Kapların yıkanması, yapılan işlemler açısından önemli bir aşama teşkil eder: tavsiye edilen yıkama
döngülerine uyun ve tüm kapların tamamen doldurulup, ardından tamamen boşaltılmasına özen
gösterin. Kötü bir yıkama işlemi yanlış sonuçlar elde edilmesine yol açar.
Konjugatı ve developman solüsyonunu dağıtmak için asla aynı kabı kullanmayın
7 - NUMUNELER
Olağan uygulama yöntemleriyle bir kan numunesi alın.
Testler sulandırılmamış serum veya plazma numuneleri üzerinde yapılacaktır (numuneler EDTA, sitrat
ve ACD gibi antikoagülanlar ile alınır). Agrega içeren numuneler testten önce santrifugasyon ile
arıtılmalıdır. Süspansiyon halindeki partiküller veya fibrin agregaları yanlış pozitif sonuçlar elde
edilmesine yol açabilir.
Tarama 7 gün içinde yapılır ise, numuneler + 2 - 8°C sıcaklıkta saklanacaktır veya -20°C sıcaklıkta
dondurulmuş olarak saklanabilecektir. Dondurma/Çözdürme işlemlerini tekrarlamaktan kaçının. Eğer
numuneler taşınacak ise, bunları etyolojik ajanların taşınması ile ilgili yürürlükteki mevzuata uygun
şekilde ambalajlayın ve tercihen dondurulmuş olarak taşıyın.
KONTAMİNE,
HİPERLİPEMİK
VEYA
HİPERHEMOLİZE
TABİ
TUTULMUŞ
SERUMLAR
KULLANMAYIN. NOT: 90 gr/l'ye kadar albumin, 50 µg/l'ye kadar biyotin ve 100 mg/l'ye kadar
bilirubin içeren numunelerde ve ayrıca 36 gr/l'ye kadar trigliserit içeren lipemik numunelerde ve 87
gr/l'ye kadar hemoglobin içeren hemolize tabi tutulmuş numunelerde hiçbir etkileşim
ispatlanamamıştır.
Anti HCV antikorları veya HCV antijeni bulunup bulunmadığını belirlemek için negatif ve pozitif
numuneler, 56° sıcaklıkta 30 dakika boyunca işleme tabi tutulduktan önce ve sonra ve ayrıca 3
dondurma çözdürme döngüsünden sonra teste tabi tutulmuştur.
TM
Bu işlemlerden hiçbiri antikorların algılanmasını etkilemez. Bununla birlikte ısıl işlem, Monolisa HCV
Ag-Ab ULTRA kiti için HCV antijeninin algılanmasına yönelik yanıtı büyük ölçüde azaltır.
6
8 - REAKTİFLERİN YENİDEN OLUŞTURULMASI- SON KULLANMA TARİHİ - SAKLAMA
TM
Monolisa
HCV Ag-Ab ULTRA kitindeki reaktifleri kullanmadan önce, 30 dakika boyunca ortam
sıcaklığında dengelenmeye bırakın
1) Kullanıma hazır reaktifler
Mikroplaka (R1)
12 şerit içeren her taşıyıcı çerçeve kapalı alüminyum poşet içine konulmuştur. Poşeti makas veya bıçak
ile birleşme noktasının 0,5 ila 1 cm üzerinde kesin. Poşeti açın ve çerçeveyi poşetten çıkarın.
Kullanılmayan şeritleri tekrar poşetin içine yerleştirin. Poşeti özenle kapatın ve yeniden +2-8°C sıcaklıkta
muhafaza edin.
Konjugat 1 kullanıma hazırdır (R6)
Kullanımdan önce ters çevirerek homojenleştirin.
Konjugat 2 kullanıma hazırdır (R7)
Kullanımdan önce ters çevirerek homojenleştirin.
2) Yeniden oluşturulacak reaktifler
Yıkama solüsyonu R2 (20X)
Solüsyonu damıtık su ile 20 kez sulandırın.. Bu şekilde, kullanıma hazır yıkama solüsyonu elde edilir. 12
şeritten oluşan bir plaka için 800 ml hazırlayın.
Enzimatik developman solüsyonu (R8 + R9)
Reaktif R9'u reaktif R8'in içinde 1/11 oranında sulandırın (Örnek: 1 ml reaktif R9, 10 ml reaktif R8 içinde
sulandırılır); 12 şeridi işlemden geçirmek için 10 ml gerekli ve yeterlidir. Homojenleştirin.
Pozitif kontrol antijeni (R5a + R5b): Çalışma solüsyonu:
R5a şişesine R5b şişesindeki solüsyonun tamamını doldurun.
Kapağını tekrar kapatıp laboratuar sıcaklığında 10 dakika bekleyin ve zaman zaman şişeyi ters çevirerek
çalkalayın.
3) Son Kullanma Tarihi
Kit +2-8°C sıcaklıkta saklanmalıdır. +2-8°C sıcaklıkta saklanan kitteki her unsur kutunun üzerinde
belirtilen son kullanma tarihine kadar kullanılabilir (özel bir uyarı bulunmadığı takdirde).
R1: Vakumlu poşetin açılmasından sonra, +2-8°C sıcaklıkta muhafaza edilen ve özenle kapatılan orijinal
ambalajlarındaki şeritler 1 ay dayanabilir.
R2: Sulandırılmış yıkama solüsyonu +2-30°C sıcaklıkta 2 hafta saklanabilir. Konsantre yıkama
solüsyonu (R2) +2- 30°C sıcaklıkta muhafaza edilebilir.
R5a + R5b: Pozitif kontrol antijeni çalışma solüsyonu +2-8°C sıcaklıkta 1 ay ve -20°C sıcaklıkta 2 ay
saklanabilir (-20°C'de dondurulduktan sonra 5 dondurma/çözdürme döngüsüne kadar). R8 + R9:
Yeniden oluşturulduktan sonra, karanlıkta saklanan reaktifler ortam sıcaklığında (18-30°C) 6 saat
boyunca kullanılabilir.
9 - ÇALIŞMA ŞARTLARI
∑
∑
∑
Önerilen protokole kesinlikle uyun.
Testin kalitesini doğrulamak için, test her uygulandığında negatif ve pozitif kontrol serumlarını
kullanın.
Doğru laboratuar uygulamalarını kullanın.
Protokol
1)
2)
Numune dağıtım ve tanıtım planını özenle hazırlayın.
R2 sulandırılmış yıkama solüsyonunu ve pozitif kontrol antijen çalışma solüsyonunu hazırlayın (R5a
+ R5b).
3) Taşıyıcı çerçeveyi ve şeritleri (R1) koruyucu ambalajdan çıkarın.
4) Plakayı ön yıkamaya tabi tutmadan doğrudan, art arda şunları ilave edin:
4.1 Her kaba 100 µl konjugat 1 (R6)
4.2 A1'e 50 µl negatif kontrol (R3),
B1, C1, D1'e 50 µl pozitif kontrol (R4),
E1'e 50 µl pozitif kontrol antijeni çalışma solüsyonu (R5a + R5b), F1'e ilk numuneden 50 µl,
G1'e ikinci numuneden 50 µl, vs.
Karışımı en az 3 defa çekerek veya bir mikroplaka çalkalayıcısı yardımıyla 5 saniye boyunca
homojenleştirin. Eğer numune dağıtımı 10 dakikadan uzun sürerse, negatif ve pozitif kontrollerin teste
tabi tutulacak numunelerden sonra dağıtılması tavsiye edilir.
7
Kullanılan sisteme bağlı olarak, kontrollerin konumu veya dağıtım sırası değiştirilebilir.
Not: Numune ilave edildikten sonra, numune (veya kontroller) + konjugat 1'i içeren haznenin
rengi menekşe renginden maviye döner. Kaplarda numune bulunup bulunmadığı 620 nm'de
yapılan spektrofotometrik bir okuma ile kontrol edilebilir (bkz. bölüm 12: NUMUNE VE
KONJUGAT İLAVELERİNİN SPEKTROFOTOMETRİ İLE KONTROL EDİLMESİ).
5)
Sızdırmazlık sağlamak için, mümkünse üstünü yapışkan bir film ile örterek, tüm yüzeyin üzerine
iyice basın.
6) Mikroplakayı 90 ± 5 dakika boyunca 37°C ± 1°C sıcaklıkta, termostatlı benmari veya kuru
mikroplaka inkübatöründe inkübe edin.
7) Yapışkan filmi çıkarın. Tüm kapların içeriğini kontamine atıklar için öngörülmüş (sodyum hipoklorit
içeren) bir konteynere çekin ve kaplardan her birinin içine minimum 0,370 ml yıkama solüsyonu
ilave edin. Yeniden çekin. Yıkama işlemini 4 kez tekrarlayın (minimum 5 yıkama). Artık hacim 10
µl'den az olmalıdır (gerekirse plakayı emici bir kâğıt üzerinde ters çevirerek kurutun).
Otomatik bir yıkayıcınız var ise, aynı işlem döngüsünü uygulayın.
8) Tüm kaplara konjugat 2 solüsyonundan (R7) hızlı bir şekilde 100 µl dağıtın. Konjugat kullanımdan
önce çalkalanmalıdır. Mümkünse yeni bir filmle kaplayın ve 37°C ± 1°C sıcaklıkta 30 ± 5 dakika
inkübe edin.
Not: Konjugatın rengi yeşildir. Kaplarda konjugat bulunup bulunmadığı 620 nm'de yapılan
spektrofotometrik bir okuma ile kontrol edilebilir (bkz. bölüm 12: NUMUNE VE KONJUGAT
İLAVELERİNİN SPEKTROFOTOMETRİK YÖNTEMLE KONTROL EDİLMESİ.
9)
Yapışkan filmi çıkarın; içindekileri çekerek tüm kapları boşaltın ve daha önce olduğu gibi 5 kez
yıkayın
10) Developman solüsyonunu hazırlayın (bkz. bölüm 8, reaktif R8 + R9).
11) Önceden hazırlanmış 80 µl'lik enzimatik faaliyet developman solüsyonunu (R8+R9) tüm kaplara
hızla dağıtın. Reaksiyonun ortam sıcaklığında (18 ila 30°C) 30 ± 5 dakika boyunca karanlıkta
gerçekleşmesini sağlayın. Bu inkübasyon sırasında, yapışkan film kullanmayın.
Not: Pembe renkte olan developman solüsyonunun dağıtılması, işlemlerin bu aşamasında görsel
olarak kontrol edilebilir. Boş bir kap ile pembemsi renkteki developman solüsyonunu içeren bir kap
arasında önemli bir renk farkı vardır. (otomatik kontrol için paragraf 12'ye başvurun: NUMUNE VE
REAKTİF İLAVELERİNİN SPEKTROFOTOMETRİ İLE KONTROL EDİLMESİ).
12) Developman solüsyonu ile aynı sıra ve dağıtım temposunu kullanarak 100 µl durdurma solüsyonu
(R10) ilave edin.
Not: Renksiz olan durdurma solüsyonunun dağıtılması, işlemlerin bu aşamasında görsel olarak kontrol
edilebilir. Substratın pembemsi (negatif numuneler için) veya mavi (pozitif numuneler için) olan rengi,
durdurma solüsyonu ilave edildikten sonra renksiz hale gelen (negatif numuneler için) veya rengi sarıya
dönen (pozitif numuneler için) kaplardan kaybolur.
13) Plakaların altını özenle silin. Durdurma solüsyonunun dağıtılmasından sonra en az dört dakika
bekleyin ve reaksiyonun sona ermesini takip eden 30 dakika içinde, bir plaka okuyucusu yardımıyla
450/620-700 nm'de optik yoğunluğu okuyun.
14) Sonuçları kayda geçirmeden önce, okuma işlemi ile plaka ve numune dağıtım ve tanıtım planının
birbirleriyle uyumlu olduğunu kontrol edin.
10 - SİSTEM ADAPTASYONU
YIKAMA: Testten azami performans elde etmek için, yıkama prosedürlerine mutlaka uyulması gerekir.
Bazı cihazlarda, kabul edilebilir bir arka plan gürültüsüne ulaşmak amacıyla yıkama döngüsü sayısını
artırmak gerekebilir.
8
11 - HESAPLAMALAR VE SONUÇLARIN DEĞERLENDİRİLMESİ
Anti-HCV antikorları ve/veya HCV kapsidi antijeninin var olup olmadığı, her numunede kaydedilen
aborbansın hesaplanan eşik değer ile karşılaştırılması suretiyle belirlenir.
1) Pozitif kontrol R4 için ölçülen absorbansların ortalamasını hesaplayınÖrnek: Pozitif
Kontrol R4
Numune
Optik yoğunluk
B1
C1
D1
Toplam
1,636
1,704
1,650
4,990
Toplam optik yoğunluk
4,990
OPTİK YOĞUNLUK R4 = -------------------------------- = ----------- = 1,663
3
3
2) Eşik Değerin (Vs) Hesaplanması
Ortalama Optik Yoğunluk R4
Vs = --------------------------------------4
Örnek: Ortalama Optik Yoğunluk R4 = 1,663
1,663
Vs = ----------= 0,415
4
3) Testi geçerli ilan etme kriterleri şunlardır
a) Negatif Kontrol R3 için: Ölçülen absorbans, eşik değer optik yoğunluğunun 0,6 ile çarpılan değerinin
altında olmalıdır.
b) Pozitif Kontrol R4 için:
Ölçülen absorbansların ortalaması 0,800 değerine eşit veya bu değerin üzerinde ve 2,400 değerine
eşit veya bu değerin altında olmalıdır.
Pozitif kontrol değerlerinden biri ortalamaya göre %30'un üzerinde bir sapma gösterirse, geri kalan
iki pozitif kontrol değeri ile yeni bir hesaplama yapın.
c) Pozitif kontrol antijeni çalışma solüsyonu için (R5a + R5b).
Ölçülen optik yoğunluk 0,500 değerinin üzerinde olmalıdır.
Negatif kontrol R3, pozitif kontrol antijeni çalışma solüsyonu (R5a + R5b), pozitif kontrol antijeni
çalışma solüsyonu (R5a + R5b) ve/veya pozitif kontrol R4'ün birden fazla değeri yukarıdaki değer
aralığının dışında kalırsa test geçersiz ilan edilir.
4) Sonuçların Yorumlanması
TM
Optik yoğunluğu eşik değerin altında olan numuneler Monolisa HCV Ag-Ab ULTRA testine göre
negatif addedilir.
Bununla birlikte, eşik değerin hemen altındaki sonuçlar (ED-%10<OY<ED) ihtiyatla yorumlanmalıdır ve
kullanılan sistemler ve laboratuar prosedürleri buna imkân tanıdığında ilgili numunelerin çift kopyalar
halinde yeniden teste tabi tutulması tavsiye edilir.
Optik yoğunluğu eşik değere eşit veya bu değerin üzerinde olan numuneler başlangıçta pozitif kabul
edilir ve son değerlendirmeden önce, çift kopya halinde teste tabi tutulmalıdır.
Testin tekrarlanmasından sonra, ikinci ve/veya üçüncü ölçüm pozitif ise, yani eşik değere eşit veya bu
TM
değerin üzerinde ise, numune Monolisa HCV Ag-Ab ULTRA testine göre pozitif addedilir. Bu iki değer
eşik değerin altında bulunur ise, numune negatif addedilir.
9
12 - NUMUNE VE KONJUGAT İLAVELERİNİN SPEKTROFOTOMETRİK YÖNTEMLE KONTROL
EDİLMESİ: (OPSİYONEL)
İLK AŞAMADA KONJUGAT 1 (R6) VE NUMUNE İLAVELERİNİN KONTROL
EDİLMESİ
Konjugat 1 (R6) ve numunenin (veya kontrolün) eşzamanlı olarak mevcut olduğu 620 nm'de yapılan
spektrofotometrik bir okuma ile kontrol edilebilir:
Eşzamanlı olarak, konjugat 1 (R6) ile bir numune (veya kontrol) içeren her haznenin optik yoğunluğu
0,800'ün üzerinde olmalıdır.
NOT: Numuneyi ilave ettikten sonra, konjugat 1'in (R6) rengi menekşe renginden maviye dönecektir.
İKİNCİ AŞAMADA KONJUGAT 2 (R7) İLAVESİNİN KONTROL EDİLMESİ
Not: Konjugat 2'nin (R7) rengi yeşildir.
Konjugat 2'nin (R7) kaplarda mevcut olduğu 620 nm'de yapılan spektrofotometrik bir okuma ile kontrol
edilebilir:
Her kap için ölçülen OPTİK YOĞUNLUK değeri 0,300 değerinin üzerinde olmalıdır (bu standardın
altındaki bir değer, konjugatın iyi dağıtılmadığını gösterir).
DEVELOPMAN SOLÜSYONU İLAVESİNİN KONTROL EDİLMESİ
490 nm'de yapılan otomatik bir okuma ile pembemsi developman solüsyonunun mevcut olup olmadığı
kontrol edilebilir: Developman solüsyonunu içeren bir kabın optik yoğunluğu 0,100 değerinin üzerinde
olmalıdır (daha düşük bir optik yoğunluk developman solüsyonunun iyi dağıtılmadığını gösterir).
Boş bir kap ile pembemsi renkteki developman solüsyonunu içeren bir kap arasında önemli bir renk farkı
vardır.
13 - TESTİN PERFORMANSI
A - ÖZGÜLLÜK İNCELEMESİ
TM
Bu testin özgüllüğünü belirlemek için, kan donörlerinden ve hastalardan alınan numuneler Monolisa
HCV Ag-Ab ULTRA kiti yardımıyla, farklı kuruluşlarda rutin olarak kullanılan testle karşılaştırılmak üzere
teste tabi tutulmuştur.
Bir kan donörü popülasyonunda özgüllük.
İnceleme 3 farklı kuruluşta, olağan veya yeni donörler üzerinde yürütülmüştür.
Kuruluşlar
Teste tabi tutulan numune sayısı
EFS Rungis EFS Bordeaux
Fransa
Fransa
2410
Montpellier
Donörleri Fransa
Toplam
2248
7161
2503
Aynı koşullarda tekrarlanabilir
5
3
4
12
pozitif numune sayısı
TM
Teste tabi tutulan 7161 kan donörü numunesinden, 12 tanesi Monolisa HCV Ag-Ab ULTRA kiti ile
tekrarlanabilir pozitif bir sonuç vermiştir, ancak bu numunelerin pozitifliği genomik teşhis (PCR) veya
TM
Immunoblot HCV PLUS Deciscan ile doğrulanmamıştır.
Bu donör popülasyonundaki özgüllük %99,83'tür (%95'teki bir güven aralığı için %99,71 ila %99,91).
Hastaneye yatırılmış hastalardan oluşan bir popülasyonda özgüllük
TM
İki farklı hastaneden alınan 469 numune üzerinde bir kohort çalışması gerçekleştirilimiştir. Monolisa
HCV Ag-Ab ULTRA testi ve rutin olarak kullanılan test ile teste tabi tutulan 469 numuneden 440'ı negatif
sonuç vermiştir; 22 numune bu iki testle pozitif bulunmuş, bunlardan 21'inin pozitif olduğu Immunoblot
TMTM
HCV PLUS Deciscan
testi ile doğrulanmış ve biri de muhtemel pozitif bulunmuştur.
TM
TM
7 numunede Monolisa HCV Ag-Ab ULTRA kiti ve immunoblot HCV PLUS Deciscan ve PCR ile
birbirini tutmayan sonuçlar elde edilmiştir. Bu 7 numune için elde edilen sonuçlar şöyledir:
TM
∑ 2 numune rutin olarak kullanılan testle pozitif ve Monolisa HCV Ag- Ab ULTRA testi ve PCR ve
TM
immunoblot HCV PLUS Deciscan ile negatif bulunmuştur. Bu numuneler rutin test için muhtemel
yanlış pozitifler addedilebilir.
∑ PCR testinin sonuçları yorumlanamayacak durumda olduğu için, 2 numune ile ilgili hiçbir sonuca
varılamamıştır. Bu numuneler özgüllük hesaplamasından çıkarılmıştır.
TM
∑ Bir numune rutin test ile pozitif, Monolisa HCV Ag-Ab ULTRA testi ile negatif, immunoblot HCV
TM
PLUS Deciscan ile belirsiz ve PCR testi ile negatif bulunmuştur.
TM
∑ Sadece Monolisa HCV Ag-Ab ULTRA testi (oran 1,7'nin altında) ve laboratuarın kullandığı rutin
TM
test ile hafif pozitif olan iki numune PCR testi ile negatif, immunoblot HCV PLUS Deciscan testi ile
belirsiz sonuç vermiştir (NS4'te zayıf bant).
Bu inceleme ile hesaplanan özgüllük, son iki numune yanlış pozitif kabul edilir ise %99,5 (443/445) ve
eski bir enfeksiyon sonucu mevcut artık antikorlar nedeniyle gerçek pozitif kabul edilir ise (immunoblot ile
10
belirsiz) %100'dür.
Girişimlere neden olabilecek numunelerde özgüllük
TM
Anti HCV antikor algılama testi için çapraz reaksiyonlara yol açabilecek 429 numune Monolisa HCV
Ag-Ab ULTRA kiti ile teste tabi tutulmuştur. Teste tabi tutulan numuneler aşağıdaki kişilerden
alınmıştır:
∑ Hepatit B, hepatit A, kızamıkçık, toksoplazmoz, kabakulak, kızamık, CMV, VHS, VEB, VZV, HTLV I,
VIH, Chagas, Flavivirus enfeksiyonuna yakalanmış hastalar, grip aşısı olmuş hastalar.
∑ Romatoid faktör açısından pozitif hastalar.
∑ Miyelom, HAMA ve ANA bulunan, otoimmün (SLE tipi) hastalıklara yakalanmış hastalar.
∑ Hamile kadınlar, siroz hastaları, diyaliz hastaları, böbrek yetmezliğinden muzdarip hastalar. Bu 429
TM
numuneden sadece biri Monolisa HCV Ag-Ab ULTRA ve anti HCV antikor algılama rutin testi ile
pozitif bulunmuştur. CE kayıtlı.
Dolayısıyla elde edilen özgüllük oranı bu popülasyonda %100'dür (428/428)
B - DUYARLILIK İNCELEMESİ
Duyarlılık HCV bulaşmış hastalardan alınan geniş bir pozitif numune dizisi üzerinde değerlendirilmiştir;
bunların arasında ticari serokonversiyon panelleri, uzman kuruluşlardan alınan numuneler ve BioRad'dan gönderilen numuneler bulunur
Teste tabi tutulan numuneler aşağıda sunulmaktadır.
HCV enfeksiyonu için pozitif olduğu doğrulanan numunelerde duyarlılık
Çoğu kronik HCV enfeksiyon kaynaklı toplam 646 numune teste tabi tutulmuştur (anti HCV
antikorlarının bulunması). 405 numune genotiplidir.
TM
Bu 646 numunenin tamamı Monolisa HCV Ag-Ab ULTRA kiti ile reaktiftir. Dolayısıyla hesaplanan
duyarlılık bu popülasyonda %100'dür.
25 ek taze pozitif numune (kan alınmasından sonraki 1 gün içinde) test edildi ve tamamı pozitif bulundu.
HCV pozitif genotipli numunelerde duyarlılık
Toplam 405 genotipli numune teste tabi tutulmuştur; bunlardan 133'ü farklı kaynaklardan alınmış olup,
272 numune hastane laboratuarlarından gönderilmiştir
Teste tabi tutulan genotiplerin dağılımı şöyledir:
Genotip
1a
1b
1c
1d 1a/b 2
2a
2b
2c
2i 2a/c 3
3a
3b
Sayı
53
Genotip
3a/b
83
4
2
4a
3
4c
3
4d
31
4h
7
4k
18
4
1
17
25
4f
4c/d
5a
6a
6d
3
1
24
1
1
Sayı
2
10
21
6
5
2
2
Tüm numuneler pozitif bulunmuştur: % 100 duyarlılık.
77
1
1b, 1a/b,
Toplam
2a/2 2a/c
1
1
405
Akut enfeksiyon kaynaklı numunelerde duyarlılık
Duyarlılık HCV enfeksiyonunun akut safhasında (engeksiyonun başlangıç safhası) alınan numunelerde
değerlendirmeye tabi tutulmuştur. 421 numuneye tekabül eden toplam 53 seronkonversiyon paneli
TM
Monolisa HCV Ag-Ab ULTRA kiti ile teste tabi tutulmuş ve CE kayıtlı bir anti-HCV antikor algılama kiti
ile karşılaştırılmıştır.
TM
Monolisa
HCV Ag-Ab ULTRA kiti enfeksiyonu hemen hemen tüm panellerde daha erken
algılamaktadır: Anti-HCV antikor algılama kitine (anti-HCV kiti) kıyasla 119 ilave numune algılanmıştır.
53 serokonversiyon paneli
(421 numune)
Anti-HCV kiti
MonolisaTMHCV Ag-Ab ULTRA
Pozitif numune sayısı
152
271
Bu serokonversiyon panellerinden 11'i viremik olmayan bir numune ile başlamaktadır; bu durum,
serolojik pencerenin (anti-HCV antikorları negatif safhası) daha doğru olarak belirlenmesine olanak
tanımaktadır.
11
Panel
Genotip
İlk numunenin alınmasından itibaren pozitifliğin
ortaya çıkma süresi (gün olarak)
TM
ARN HCV **
Anti-HCV kiti
Monolisa HCV AgAb ULTRA
Anti-HCV kiti ile
TM
Monolisa HCV
Ag-Ab ULTRA
arasındaki fark
(gün)
BCP-6211
1a
140
186
140
46
BCP-6213
1a
11
43
30
13
BCP-6222
1a
17
40
17
23
BCP-6225
1a
45
78
45
33
BCP-6227
1a
42
74
46
28
BCP-9041
1a
24
62
24
38
BBI-PHV919
1a
25
28
28
0
BCP-9054
3a
52
60
52
8
BCP-9055
NG*
31
68
33
35
BCP-6216
NG*
23
23
23
0
NABI-SC90
NG*
10
52
10
42
38.2
64.9
40.7
24.2
Gün olarak
ortalama
* Genotipli değil
** RNA testlerinin sonuçları panel tedarikçileri tarafından belirtilenlerdir.
TM
Bu 11 panel arasında, Monolisa HCV Ag-Ab ULTRA kiti HCV enfeksiyonunu bir anti-HCV kitine
TM
kıyasla ortalama 24 gün daha erken algılamaktadır. Bu avantaj özellikle Monolisa HCV Ag-Ab ULTRA
kitinde kullanılan HCV kapsid antijeninin algılanmasından kaynaklanmaktadır.
Antijen Duyarlılığı
Oran: Numune Optik Yoğunluğu/Eşik Değer Optik Yoğunluğu
Antijen duyarlılık miktarı ticari serokonversiyon panellerinde, mesela BBI 917 panelinde ortaya
konulabilir.
TM
Bu eğride Monolisa HCV Ag-Ab ULTRA kitinin duyarlılığı, bir anti HCV antikor algılama testi ile
karşılaştırılabilir.
Erreur ! Source du renvoi introuvable.
12
Hassasiyet
TM
Monolisa HCV Ag-Ab ULTRA testinin hassasiyeti 7 numune incelenerek belirlenmiştir: 1 numune HCV
antikorları açısından negatif, 3 numune anti HCV antikorları açısından pozitif ve 3 numune HCV Ag
açısından pozitif bulunmuştur.
Tekrarlanabilirlik (test içi) bu 7 numunenin incelenmesi ile belirlenmiştir; numuneler aynı işlem sırasında
30 kez teste tabi tutulmuştur.
Tekrarlanabilirlik (testler arası) bu 7 numunenin incelenmesi ile belirlenmiştir; numuneler 20 gün boyunca
çift kopya olarak ve her gün birbirinden bağımsız iki test yapılarak teste tabi tutulmuştur (NCCLS EP5
prosedürü). Sonuçlar aşağıdaki tablolarda toplu olarak verilmiştir:
Tablo 1: Test İçi Tekrarlanabilirlik
Numune
Ortalama oran
DS
Ag-Ac HCV Negatif
0,14
0,01
6,1
Ac HCV zayıf pozitif
1,12
0,04
3,65
Ac HCV orta pozitif
2,39
0,08
3,39
Ac HCV güçlü pozitif
4,88
0,18
3,7
Ag HCV zayıf pozitif
1,14
0,03
3,04
Ag HCV orta pozitif
1,97
0,06
3,02
0,14
2,38
Ortalama oran
DS
CV%
Ag-Ac HCV Negatif
0,16
0,02
12,4
Ac HCV zayıf pozitif
1,2
0,08
6,65
Ac HCV orta pozitif
2,39
0,13
5,38
Ac HCV güçlü pozitif
4,77
0,17
3,58
Ag HCV zayıf pozitif
1,13
0,09
7,97
Ag HCV orta pozitif
2,0
0,15
7,73
Ag HCV güçlü pozitif
5,86
6 pozitif numune için elde edilen CV değerleri %10'un altındadır.
CV%
Tablo 2: Testler Arası Tekrarlanabilirlik
Numune
Ag HCV güçlü pozitif
5,99
0,37
6 pozitif numune için elde edilen Varyasyon Katsayısı değerleri %15'in altındadır.
6.2
14 - TEST LİMİTLERİ
Hepatit C virüsünün bulaştığı hastaların immünolojik yanıtlarındaki çeşitililk nedeniyle (özellikle
serokonversiyonlar sırasında), kullanılan antijenik proteinlerin niteliğine bağlı olarak testler arasında
algılama farklılıkları gözlemlenebilir. Bir tarama testi sırasında elde edilen negatif bir inceleme sonucu,
hepatit C virüsüne veya hepatit C virüs enfeksiyonuna maruz kalma olasılığını ortadan kaldırmaz.
Her türlü ELISA tekniği yanlış pozitif sonuçlara yol açabilir. Tekrarlanabilir pozitif bulunan her türlü
TM
numune için reaksiyon özgüllüğünün, Monolisa HCV Ag-Ab ULTRA kiti yorumlama kriterlerine göre
uygun bir yöntemle kontrol edilmesi tavsiye edilir: Anti-HCV antikor tarama ELISA testinin tek başına
kullanılması veya anti-HCV antikorlarının varlığını kanıtlamak için bir immünoblot testi kullanılması.
Gerekirse, bir HCV viral genom araştırma testi veya özel bir HCV antijen tarama testi, ardından bir
nötrleştirme testi kullanın.
Numune ve/veya konjugat ve/veya developman solüsyonu ilavelerini kolorimetri ile doğrulama yöntemi
dağıtılan hacimlerin doğruluğunun kontrol edilmesini sağlamaz, sadece numune ve/veya konjugat
ve/veya developman solüsyonunun ortamda mevcut olduğunu gösterir. Bu yöntemle elde edilen hatalı
yanıt oranı kullanılan sistemin hassasiyetine bağlıdır (%10'un üzerindeki kümülatif pipetleme ve okuma
varyasyon katsayısı değerleri bu kontrolün kalitesini büyük ölçüde azaltabilir).
13
15 - KAYNAKÇA
∑
∑
∑
∑
∑
∑
∑
∑
∑
∑
∑
∑
∑
∑
14
Busch MP, Kleinman SH. Committee report: nucleic acid amplification testing of blood donors for
transfusion-transmitted infectious diseases. Report of the Interorganizational Task Force on Nucleic
Acid Amplification Testing on Blood Donors. Transfusion. 2000, 40: 143-1 59.
Busch MP, Kleinman, SH, Nemo GJ. Current and emerging infectious risks of blood transfusions.
JAMA. 2003, 289: 959-962.
Bouvier-Alias M, Patel K, Dahari H, Beaucourt S, Larderie P, Blatt L, Hezode C, Picchio G et al.
Clinical utility of total core HCV core antigen quantification: a new indirect marker of HCV
replication. Hepatology. 2002, vol 36: 211-218.
Jackson BR, Busch MP, Stramer SL, AuBuchon JP. The cost-effectiveness of NAT fot HIV, HCV
and HBV in whole–blood donations. Transfusion. 2003, 43: 721-729.
Lambert N, Vermet L, Bordier M, Clément A, Costaille M, Prigent V, Flecheux O, Sanjuan A et al.
Performance features of the new Bio-Rad HCV antigen and antibody assay: MonolisaTM HCV AgAb ULTRA. Vox sanguinis. 2004, 87 (suppl 3): 61-62.
Laperche S, Le Marrec N, Simon N, Bouchardeau F, Defer C, Maniez-Montreuil M, Levayer T,
Zappitelli JP, Lefrère JJ. A new HCV core antigen assay based on disassociation of immune
complexes: an alternative to molecular biology in the diagnosis of early HCV Infection. Transfusion.
2003, 43: 958-962.
Nübling CM, Unger G, Chudy M, Raia S, Löwer J. Sensitivity of HCV core antigen and HCV RNA
detection in the early infection phase. Transfusion. 2002. 42: 1037-1 045.∑ Masalova OV, Atanadze
SN, Samokhvalov EI, Petrakova NV, Kalinina TI, Smirnov VD, Khudyakov YE, Fields HA, Kushch
AA. Detection of hepatitis C virus core protein circulating within different virus particle populations.
Journal of Medical Virology. 1998, 55: 1-6.
Pawlotsky JM. Use and interpretation of virological tests for hepatitis C. Hepatology. 2002, 36: 565573.
Pillonel J, Laperche S, Saura C, Desenclos JC, Couroucé AM et al.. Trends in residual risk of
transfusion-transmitted viral infections in France between 1992 and 2000. Transfusion. 2002, 42:
980-988.
Simmonds P. HCV heterogeneity: the science and the practice. In Hepatitis C. 1998. Yanamouchi
Europe BV Ed. p 3-10.
Strader DB, Wright T, Thomas DL, Seeff LB. Diagnosis, management and treatment of Hepatitis C.
AASLD Practice Guideline. Hepatology. 2004, 39: 1147-1171.
Centers for Disease Control. Guidelines for Laboratory testing and result reporting of antibody to
hepatitis C virus. MMWR 2003, 52: RR-3.
EASL International Consensus Conference on Hepatitis C. Consensus Statement. Journal of
Hepatology. 1999, 30: 956-961.
NIH Consensus Statement on Management of hepatitis C: 2002. NIH Consensus and State-oftheScience Statements. 2002, 19 N°3. 46p.
Bio-Rad
3, bd Raymond Poincaré
92430 Marnes-la-Coquette – Fransa
Tel.: +33 1 47 95 60 00
Faks: +33 1 47 41 91 33
11/2010
Kod : 883607